熒光顯微鏡是檢查細(xì)菌的首選

在細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查中以光學(xué)顯微鏡為常用，借助顯微鏡顯微放大后可以觀察到細(xì)菌的一般形態(tài)和結(jié)構(gòu)。檢查細(xì)菌常用的顯微鏡有以下4種：

1.生物顯微鏡：普通生物顯微鏡通常以自然光或燈光為光源，其波長約0.5μm。在*佳條件下，顯微鏡的*大分辨率為波長的一半，即0.25μm，而肉眼所能看到的*小形象為0.2mm，故在普通光學(xué)顯微鏡下用油鏡放大1000倍，可將0.25μm的微粒放大到0.25mm，肉眼便可以看清，一般細(xì)菌大0.25μm，故用普通生物顯微鏡均能清楚看到。

2.暗視野顯微鏡：暗視野顯微鏡是用特制的暗視野集光器代替普通光學(xué)顯微鏡上的明視野集光器，由于暗視野集光器的中央為不透光的遮光板，光線不能直接射入鏡筒，故背景視野黑暗無光，而從集光器四周邊緣斜射到標(biāo)本部位的光線，經(jīng)菌體散射后而進入物鏡。故在強光的照射下，可以在黑暗的背景中看到發(fā)亮的菌體，猶如夜空中的明亮星星。明暗反差提高了觀察的效果，多用于檢查不染色的活細(xì)菌和螺旋體的形態(tài)及運動觀察。

3.相差顯微鏡：在進行未染色標(biāo)本檢查時，由于細(xì)菌的折旋光性與周圍環(huán)境的折旋光性相近，明暗對比不明顯。在普通光學(xué)顯微鏡下不易看清，用暗視野顯微鏡只能看到發(fā)亮的菌體輪廓，看不清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。而相差顯微鏡依據(jù)光波穿過標(biāo)本中密度不同的部位時，引起光相差異的原理，利用相差板的光柵作用，改變直射光的光相和振幅，將光相的差異轉(zhuǎn)換成光的強度的差異，使細(xì)菌中的某部分結(jié)構(gòu)比其他部分深暗，襯托出鮮明的對比。本法主要用于檢查不染色活細(xì)菌的形態(tài)及某些內(nèi)部結(jié)構(gòu)。

4.熒光顯微鏡：熒光顯微鏡以紫外光或藍紫光為光源，能激發(fā)熒光物質(zhì)發(fā)光使之成為可見光。細(xì)菌經(jīng)熒光色素染色后，置于熒光顯微鏡下，即可激發(fā)熒光，因此在暗色的背景下可以看到發(fā)射熒光的細(xì)菌。由于紫外光與藍紫光的波長較短（0.3～0.4μm），故分辨率得到進一步提高。熒光顯微鏡還廣泛應(yīng)用于免疫熒光技術(shù)中。