顯微鏡攝影的基本步驟

一． 顯微攝影的基礎(chǔ)知識

1． 顯微攝影裝置的放大倍率
照片的放大倍率，決定于照相目鏡的型號和顯微攝影裝置的投影長度。如前所述，目前光學顯微鏡的光路系統(tǒng)是*無限遠光學校正系統(tǒng)，與以前的有限遠光學校正系統(tǒng)有了很大的改進。所以兩種系統(tǒng)的照片放大倍率計算方法不同。
(1) 有限遠光學校正系統(tǒng)：　照片總放大倍率=物鏡放大倍率X照相目鏡放大倍率（沒有中間附件時）或 照片總放大倍率=物鏡放大倍率X照相目鏡放大倍率X中間附件系數(shù)（連接有中間附件時）。
(2) *無限遠光學校正系統(tǒng)：　照片總放大倍率=物鏡放大倍率X照相目鏡放大倍率（中間附件不影響放大倍率）。
(3) 大版照相：照片總放大倍率=物鏡放大倍率X照相目鏡放大倍率X 3。
照片的總放大倍率是指底片上圖象的放大倍率，而不是指底片沖洗到相紙后的放大倍率。
2． 物鏡與目鏡的不同組合，得到的分辨率不同
即使照片的總放大倍率相同，它的分辨率是根據(jù)物鏡、目鏡的不同組合而不同的。在顯微攝影時應(yīng)盡量使用低倍照相目鏡與高倍物鏡組合，這樣能改進底片平面象的分辨率。
3． 標本畫面的構(gòu)圖
顯微攝影時，視場中的標本往往不適合攝影構(gòu)圖，克服這個問題的辦法是轉(zhuǎn)動照相機，以使標本成比例得適合構(gòu)圖的要求。但這時要進行操作顯微鏡來適合攝影構(gòu)圖就更困難了。一般人們樂用的方法是轉(zhuǎn)動載物臺，將標本調(diào)到畫幅理想的構(gòu)圖中。

二． 顯微攝影技術(shù)
1． 工作前的準備
(1) 光路系統(tǒng)的清潔　　顯微攝影必須保證光路系統(tǒng)的清潔，任何光學部件有了污垢及灰塵，均會影響照片的質(zhì)量。物鏡、目鏡及聚光鏡等部件，如污垢長期得不到清理，還會引起霉菌的生長，致使不能應(yīng)用。各部件在擦拭時，只能清理表面，而不應(yīng)任意拆卸。
(2) 光軸中心的調(diào)整　　顯微攝影時光軸中心的調(diào)整是*不可忽視的，否則拍出的圖象，各部分的感光不勻。關(guān)于調(diào)整的方法前已述及，這里不予重復(fù)。
(3) 其它準備工作　　檢查鏡體與照相系統(tǒng)的安裝是否正確；根據(jù)被檢物體的情況選用何種感光片；如為半自動和全自動照相系統(tǒng)，需調(diào)節(jié)好相應(yīng)的按鈕。拍攝前需用觀察目鏡觀察，先調(diào)好兩眼的瞳距，使兩個視場的象合而為一，再調(diào)節(jié)好兩眼的屈光度以適應(yīng)觀察者的視力。
2． 視場光闌與孔徑光闌的應(yīng)用
視場光闌的作用前已述及， 在觀察時根據(jù)物鏡的倍率不同視場光闌開大或縮小而給予相應(yīng)的光束面積，以達到鏡檢的優(yōu)良效果。在顯微攝影時它起著增加和減弱影象反差的作用。當視場光闌開大到一定程度時，照射到被攝物體上的光，即會產(chǎn)生反射與不規(guī)則的散射，造成影象反差的損失；當視場光闌收縮到取景框邊緣的外方時，圖象的反差就得到改善；視場光闌過度的收縮接近取景框，則圖象的四角部分將被切去。因此，在顯微攝影時，視場光闌的應(yīng)用是重要的一個因素，應(yīng)開啟到比取景框稍大的位置。
3． 人眼屈光度的校正
鏡檢時，每人眼睛的屈光度不盡都一致，總是存在著一定的差別。當甲看清視場中的圖象后，乙來觀察時就不一定清晰，這是由于兩人眼睛的屈光度有所不同而造成的，這一差別很易解決，只要調(diào)節(jié)一下微調(diào)焦旋鈕就很容易使圖象清晰。但是在顯微攝影時，用這種方法是不能解決的，因為上述是通過改變工作距離的長短來補償兩人的屈光度；而顯微攝影則必須使物鏡處于它本身的工作距離處，使成象清晰地落在感光片的平面處，才能使感光片得到清晰的圖象。往往有這樣的經(jīng)驗，在視場中觀察到的圖象很滿意，可拍攝出來的底片則模糊不清，就是這個原因。
顯微攝影的調(diào)焦方法，必須利用取景側(cè)目鏡（聚焦望遠鏡）或取景目鏡，首*行屈光度的校正，即旋轉(zhuǎn)取景側(cè)目鏡或取景目鏡上的圓環(huán)，使取景框中的雙十字線達到*清晰的程度，這時再進行調(diào)焦使圖象清晰，便可進行曝光。但應(yīng)指出，應(yīng)用同一只眼睛調(diào)節(jié)，不然兩眼之間也會存在屈光度的差異。在調(diào)節(jié)雙十字線時，應(yīng)盡快予以調(diào)整，否則長時間的調(diào)整，人眼將產(chǎn)生適應(yīng)性，則不易調(diào)得準確，如遇此情況，可遠眺前方稍待一段時間后再進行調(diào)節(jié)。
在使用4X以下物鏡時，由于焦深較長，只用取景目鏡還會發(fā)生調(diào)焦的誤差，這時可利用“聚焦放大鏡”來克服誤差。其方法是將聚焦放大鏡放在取景側(cè)目鏡或取景目鏡上，擰緊固定螺釘，再旋轉(zhuǎn)該鏡筒上的圓環(huán)，看清雙十字線后物象是否同時清晰，如不清晰，再進行調(diào)節(jié)。在使用10X和20X物鏡時，當雙十字線與圖象同時清晰后，用眼環(huán)視一下，看雙十字線與圖象是否有移動現(xiàn)象，如果圖象不移動，則說明焦點已對準；如有移動，需用微調(diào)重新調(diào)節(jié)。
4． 曝光的補償