徠卡顯微鏡 - 快速多色活體成像的理想選擇：SP8 DIVE
隨著生命科學(xué)的不斷深入發(fā)展，科學(xué)家們越來越希望能觀察到生物活體內(nèi)細(xì)胞組織的生理過程及蛋白分子之間的相互關(guān)系。近年來，新熒光蛋白的開發(fā)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)和新標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，使科學(xué)家們能夠得到帶有多種熒光的模型動物用于生命科學(xué)包括疾病的研究。
多光子顯微鏡越來越多的用于活體動物熒光成像，但是，傳統(tǒng)多光子顯微鏡使用濾片分離發(fā)射光來檢測，不同染料經(jīng)過多光子激發(fā)后產(chǎn)生的串色現(xiàn)象不容易排除，所以只能使用順序掃描來進行多色成像，多個序列成像將成像時間增加了數(shù)倍，并且多光子激光器在轉(zhuǎn)換波長時比較慢（通常需要約1秒），這大大減慢了多色成像的速度，導(dǎo)致生命過程的錯失和熒光淬滅的增加。所以，使用傳統(tǒng)多光子跟蹤活體內(nèi)多組分變化是非常困難或者說是根本不可能的！
徠卡顯微系統(tǒng)2018年新產(chǎn)品——SP8 DIVE光譜型的多光子顯微鏡成功解決了這個難題：多通道自由調(diào)節(jié)檢測范圍，實現(xiàn)同一波長激發(fā)兩種及以上染料，成為高分辨率快速深度活體成像的理想選擇！
視頻1.活體小鼠大腦毛細(xì)血管內(nèi)的血細(xì)胞流動和相應(yīng)神經(jīng)細(xì)胞的分布。
Green: dye488, Red：tdTomato，成像速度2048×2048@3.8 fps。
完整視頻500幅圖像僅用2分鐘13秒！
視頻2. 將圖像調(diào)整為1024×400即可實現(xiàn)18.5 fps更快的成像速度
上面視頻用900 nm紅外光同時激發(fā)tdTomato 和dye488，通過分別調(diào)節(jié)檢測范圍（圖3）避免二者的串色，同時分別*大程度地收集有效光子。完全避免不同波長之間依次切換成像，大大節(jié)省時間。配合Leica共聚焦使用的 8k或12k Hz高速掃描，能夠抓拍到血管內(nèi)血細(xì)胞的流動。這在傳統(tǒng)濾片型多光子共聚焦顯微鏡是完全不可能實現(xiàn)的。
圖1. 4Tune光譜式檢測器讓您拖動鼠標(biāo)即可自由選擇檢測光譜
視頻3. Thy1-eYFP 小鼠腦皮層血細(xì)胞三次諧波成像
綠色為神經(jīng)元表達的YFP熒光，紅色為血細(xì)胞的三次諧波信號。
1300 nm同時激發(fā)得到Y(jié)FP和THG信號，256x256@70 fps
此外，德國波恩科學(xué)家使用SP8 DIVE還拍攝到了 Thy1-eYFP 小鼠腦皮層血細(xì)胞的三次諧波成像（THG，視頻3）。同樣是利用了檢測光譜自由可調(diào)的優(yōu)點，準(zhǔn)確地得到了熒光和THG信號的組合成像。
所以，SP8 DIVE的光譜自由可調(diào)在多色活體快速成像方面具備無可比擬的優(yōu)勢。輕而易舉實現(xiàn)對活體動物體內(nèi)深部快速生理過程的成像，如鈣離子等活性物質(zhì)釋放、血管和組織內(nèi)物質(zhì)代謝、神經(jīng)沖動的產(chǎn)生和傳播等等，是觀察活體動物深部結(jié)構(gòu)及快速生理過程的理想選擇。
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