徠卡顯微鏡激光顯微切割特定應(yīng)用的耗材

有許多不同類型的消耗品的激光顯微切割儀器。它們涵蓋了廣泛的應(yīng)用，從基本到高度專業(yè)化，使科學(xué)家能夠選擇自己單獨(dú)的配置無論他們的研究領(lǐng)域。

最常見的消耗品是各種玻璃膜載玻片與標(biāo)準(zhǔn)帽或蓋條帶的組合來收集dissectates。幀滑動(dòng)時(shí)，培養(yǎng)皿有和沒有PEN膜，可堆疊膜環(huán)，Ibidi載玻片和多個(gè)腔室培養(yǎng)玻片也可使用。此外，芯片實(shí)驗(yàn)室（LOC），所述AmpliGrid，一種特殊的形式可以在激光顯微切割使用。

玻璃膜載玻片

覆蓋有具有高的紫外線吸收膜的玻璃載片，使它們特別適合于冷相片消融（汽化），被稱為玻璃膜的載玻片。這種類型的滑動(dòng)示出在左側(cè)的圖1a。

施加到玻璃載片的上表面上，所述膜粘接于玻璃在其邊緣處，以便一個(gè)最小的空間保留在玻璃和膜之間。將膜特殊涂層，以確保試樣的最佳粘合。

在一般情況下，玻璃膜載玻片具有在膜 - 輔助的激光顯微切割（LMD）多用途的應(yīng)用潛力，并配有各種涂料用于不同應(yīng)用。(奧林巴斯顯微鏡)

小心處理的箔是必不可少，以避免損壞該膜。應(yīng)該避免在玻璃和膜之間積聚的水分，因?yàn)檫@可能會(huì)導(dǎo)致dissectates粘到玻璃上。有玻璃載玻片兩種不同類型的膜：

PPS（聚苯硫醚）

PEN（聚萘二甲酸）

圖1a和1b分別示出用于與在不同地方的載玻片的掃描階段標(biāo)準(zhǔn)試樣保持器。

圖1A，1B：每張照片顯示了掃描階段容納3張載玻片標(biāo)準(zhǔn)樣品架。圖1a示出一個(gè)載玻片（左），一幀滑動(dòng)（中心）和一個(gè)Ibidi載玻片（右）。

（載玻片尺寸：52×76mm，使用面積為LMD 39×45 MM）

這些是PEN或PPS膜的載玻片為所用，例如，在組織切片中神經(jīng)科學(xué)的形式（參見尤其是大的標(biāo)本艾倫瓊斯'視頻）。一個(gè)特殊標(biāo)本持有人可用于顯微切割。大玻片可以看出，在Figsures 2a和2b。

PEN與PPS膜滑梯

（載玻片尺寸：26×76mm，使用面積為LMD 19×41mm）

標(biāo)準(zhǔn)載玻片具有PEN膜。這些可用于最LMD應(yīng)用除DIC模式和在植物研究中使用的非常高的激光能量，例如。  

PEN膜的載玻片，可以在經(jīng)過認(rèn)證的無RNA酶和DNA酶-自由版本可用，以保證在DNA和RNA的研究無污染的工作。像的PEN膜的載玻片，PPS包衣膜載玻片還可以在幾乎所有激光輔助顯微切割技術(shù)中使用。的PPS膜的載玻片有較少的自體熒光和一個(gè)光滑的表面結(jié)構(gòu)比與滑動(dòng)PEN膜，但具有較少的抗性比PEN滑動(dòng)以與二甲苯化學(xué)處理，例如。特別是，PPS比PEN更適合組合使用與HY-升套件。另外，也可以使用浸油的物鏡連同載玻片用于激光顯微解剖。當(dāng)使用載玻片用油浸物鏡，把它們?cè)谠嚇颖３制骶哂忻嫦蛳路降慕M織是重要的。

圖2a和2b：該試樣保持器可用于大的PEN或PPS滑動(dòng)以及用于培養(yǎng)皿（參照?qǐng)D7A）。

大PEN和PPS載玻片

（載玻片尺寸：52×76mm，使用面積為LMD 39×45 MM）

這些是PEN或PPS膜的載玻片為所用，例如，在組織切片中神經(jīng)科學(xué)的形式（參見尤其是大的標(biāo)本艾倫瓊斯'視頻）。一個(gè)特殊標(biāo)本持有人可用于顯微切割。大玻片可以看出，在圖2a和2b。

PEN蓋玻片載玻片

（載玻片大小：26x76mm，使用面積為LMD 19x41mm）

這些是玻璃蓋玻片載玻片用的PEN膜和可用于大多數(shù)LMD的應(yīng)用，如在PEN載玻片上。除了標(biāo)準(zhǔn)的PEN載玻片蓋玻片載玻片可用于高能量的應(yīng)用程序和與150x物鏡的組合。

幀載玻片

（載玻片尺寸：26×76mm，使用面積為LMD 16×45 MM）

幀載玻片包括可覆蓋有各種膜（圖3b）的金屬框架的。下面的膜可用于這種類型的載玻片的：

PPS（聚苯硫醚）

PET（聚對(duì)苯二甲酸乙二酯）

POL（聚酯）

螢光燈（fluocarbon）

再加上特殊的150X干物鏡，提供了極高的分辨率，無需浸油，幀載玻片是優(yōu)秀的單細(xì)胞和染色體應(yīng)用。作為dissectates使用幀滑動(dòng)時(shí)，直接附著到該箔，它們特別適合于非常小的樣品的夾層，例如用于染色體解剖。用適合恰好進(jìn)入幀載玻片前面的腔中的凸起的表面結(jié)構(gòu)的框架支承有助于組織切片應(yīng)用到膜上。這就形成了一個(gè)平坦的表面上，并支持該膜。該框架支承形成膜的骨架，因?yàn)樗牵ㄟ^提供足夠的阻力和張力施加樣品膜（圖3a）。

等適當(dāng)涂布玻璃膜載玻片，可以使用與PPS膜框架載玻片幾乎任何應(yīng)用除了在DIC的模式。

而用POL膜框架滑動(dòng)主要用于染色體夾層，采用PET膜框架的載玻片是優(yōu)秀的后續(xù)MALDI-TOF分析技術(shù)。

特別FLUO膜特別適合用于熒光，PH值和DIC。

圖3A：用膜和框架的支持者作為“脊梁”金屬框架    圖3B：與框架支持者完整的幀載玻片插入

董事載玻片

從表達(dá)病理科主任的載玻片是膜免費(fèi)回收使用“繪制和掃描”模式的特殊解決方案。

在“畫和掃描”模式也applyable通常的標(biāo)準(zhǔn)載玻片，但因此更多的能量需要樣品消融相比，DIRECTOR載玻片。

帽/離心管

夾層由LMD后，將樣品滴通過重力進(jìn)入收集容器中，例如離心管和它們的瓶蓋。不同載玻片與瓶蓋的組合是最常見的應(yīng)用中的激光顯微切割之一。大多數(shù)情況下，標(biāo)準(zhǔn)0.2毫升和0.5ml管中使用，無論是與空（干）帽或具有帽填充有合適的緩沖液，或類似的合適的介質(zhì)。例如，用RNA酶抑制劑在帽中的溶液可以在激光顯微切割過程之后立即防止核酸的分解。同樣，蛋白質(zhì)可以保持在穩(wěn)定的狀態(tài)下與緩沖溶液。空，干股提供識(shí)別dissectates的一個(gè)很好的方式，可以通過服用前/后的圖片可以很容易地進(jìn)行比較?；旧?，microdissectate可以轉(zhuǎn)移到任何標(biāo)準(zhǔn)上限。圖4a和4b示出的匹配收集器帽和微量離心管。雖然可以使用專用OptiCaps，即使這些不是必需的徠卡激光顯微切割。OptiCaps具有集成的光學(xué)元件，以確保最佳的照明均勻性，也可以是“粘接劑”。

圖4a和4b：對(duì)于帽和微量離心管特殊收集裝置可以在正常的尺寸被用于0.2毫升（圖4A，上圖）和0.5ml（圖4a中，底部）。該收集器將樣品下立即位于，dissectates落入直入管帽由于重力的作用。

對(duì)于8孔條，8孔條帽和多井載玻片狀18-井Ibidi載玻片或LOC（芯片實(shí)驗(yàn)室）滑動(dòng)萬向支架

8孔條，可用于高容量應(yīng)用（例如，對(duì)于活細(xì)胞收集到培養(yǎng)基），8孔條帽是理想的高通量應(yīng)用。此外，萬向支架適合攜帶（片上實(shí)驗(yàn)室）設(shè)備室載玻片，多井載玻片以及LOC。所有設(shè)備可以被用作用于激光顯微切割收集裝置。

8孔條

圖5a和5b：8孔條作為dissectate集熱使細(xì)胞培養(yǎng)物的高通量篩選。

（用作LCC模式收藏家）

收集器如這些被開發(fā)，以獲得通過解剖活細(xì)胞的后續(xù)檢查的更高的采樣，并且可以結(jié)合在一起形成的96孔托盤。圖5a和5b分別示出一個(gè)適當(dāng)?shù)谋３制髋c8孔條，可以被接合，以形成良好的托盤。以及托盤的基礎(chǔ)用于執(zhí)行高通量篩選細(xì)胞培養(yǎng)物。

使用這樣的篩選技術(shù)，大批量的單細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行分析，并且如果有必要，在極短的時(shí)間內(nèi)復(fù)墾。

8孔條帽

（分子生物學(xué)/ PCR）

0.2ml的8孔條蓋可以用作收集器用于激光顯微切割。繼激光顯微切割，8孔帶瓶蓋可以放在0.2毫升8孔條或96孔PCR-板直接插入PCR機(jī)（應(yīng)要求提供）。使用8-帽帶已證明適合于隨后的PCR，定量PCR或其它加熱或冷卻過程中，特別是對(duì)于大量樣品。

圖a和6b：8孔條帽

LOC（芯片實(shí)驗(yàn)室） - AmpliGrid

（載玻片尺寸：26×76 MM）

該AmpliGrid是LOC（芯片實(shí)驗(yàn)室）的一種特殊形式，并且是另一替代用于收集LMD dissectates。所述AmpliGrid是在作為擴(kuò)增平臺(tái)超低體積應(yīng)用疏水和親水區(qū)域化學(xué)結(jié)構(gòu)滑動(dòng)。它由一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大小的玻璃載片，其特點(diǎn)是它的48反應(yīng)室這也適合用于收集解剖單細(xì)胞（圖7A，7B）。作為dissectates使用徠卡顯微鏡LMD6500 / 7000時(shí)轉(zhuǎn)移到AmpliGrid通過重力的作用，液體不一定必須要施加到反應(yīng)點(diǎn)提前，為的是與采用的彈射技術(shù)手段的情況。解剖的細(xì)胞可以被收集“干”。雖然可以使用的緩沖溶液，它不是強(qiáng)制性的。

細(xì)胞剝離，PCR或RT后（逆轉(zhuǎn)錄酶）-PCR是立即可以在AmpliGrid的使用超低體積擴(kuò)增技術(shù)的48反應(yīng)點(diǎn)。創(chuàng)建由疏水和親水相互作用，膠束表面結(jié)構(gòu)保持的反應(yīng)混合物（其直接施加至AmpliGrid擴(kuò)增）的形狀的壓降（通常為1微升）。

圖7a和7b：在插入專門收集人“，LOC捕手”（AmpliGrid）保證高樣品通量的PCR分析或RT-PCR方法。

通用持有人也能夠?yàn)槠渌鸏OC設(shè)備，例如18孔Ibidi ?載玻片和玻片活細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用。

耗材在LCC模式中使用

下面的載玻片，在激光剝離，操作和選擇技術(shù)兼容LCC（活細(xì)胞培養(yǎng)）模式：

培養(yǎng)皿（與PEN膜）

可堆疊膜環(huán)

Ibidi載玻片

這些也可以作為收集容器恢復(fù)耕種。

另外，上述的滑動(dòng)可與常用的收集器（0.5毫升試管，0.2 ml反應(yīng)管，8孔條，LOC（組合芯片實(shí)驗(yàn)室）， Ibidi載玻片，常規(guī)培養(yǎng)皿和多個(gè)腔室培養(yǎng)玻片）。

培養(yǎng)皿

培養(yǎng)皿一般適合用于細(xì)胞培養(yǎng)（LCC），并且可有或無PEN膜。圖。圖8a示出了已示于圖的試樣保持器。2a和2b為大PEN載玻片和培養(yǎng)皿; 一個(gè)培養(yǎng)皿的PEN膜已經(jīng)被插入，而不是一個(gè)大的滑動(dòng)。圖。圖8b示出了使用的培養(yǎng)皿作為集電極的。

圖8a：在這里，培養(yǎng)皿用在試樣保持器圖1中所示的大的載玻片和培養(yǎng)皿。2.可堆疊膜環(huán)也可以與此支架相結(jié)合。 圖8b：從激光顯微切割的dissectate由此處培養(yǎng)皿收集。

培養(yǎng)皿沒有PEN膜

（?50mm）

常規(guī)培養(yǎng)皿未經(jīng)PEN膜用于收集和recultivate的dissectate。培養(yǎng)皿未經(jīng)PEN膜不能用于激光顯微切割樣品支架使用。但是，選擇的區(qū)域可以被操縱的LMD激光和觀察到的時(shí)間使用時(shí)間推移短片拍攝功能很長時(shí)間。

培養(yǎng)皿PEN膜

（?為50mm，使用面積為LMD?30 MM）

細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)皿用的PEN膜，可以在解剖LCC模式，并轉(zhuǎn)移到其他培養(yǎng)皿（使用或不使用的PEN膜）或其它合適的收集容器。該膜可以涂覆有聚-L-賴氨酸或膠原為更好的粘附和細(xì)胞生長。

可堆疊膜環(huán)

（?為50mm，使用面積為LMD?50mm）

這些是覆蓋有被插入到50mm直徑的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)皿的膜環(huán)?？啥询B膜環(huán)使得能夠在活小區(qū)扇區(qū)進(jìn)行激光顯微切割，并且是單細(xì)胞的選擇是特別有用的。可堆疊膜環(huán)還可以連接以形成雙鏈體的環(huán)系統(tǒng)，以使所述dissectate的無污染傳輸。2堆疊膜環(huán)擰在一起用于此物鏡。立即進(jìn)一步培養(yǎng)所述dissectate的也有可能與夾層技術(shù)。可堆疊膜環(huán)，可以用來作為試樣夾具和作為dissectates集合持有人。擰在一起作為一個(gè)三明治，他們并不需要一個(gè)專門收集持有者 - dissectates直接捕捉底部膜環(huán)。與合適的帽或可選氣候室的解剖系統(tǒng)使一個(gè)無污染的選擇過程。

Ibidi載玻片

（載玻片尺寸：26×76mm，30微升液體適用每孔）

這些載玻片都配備了孔是專門為活細(xì)胞的激光顯微切割設(shè)計(jì)的。每張載玻片有18個(gè)凹槽與PEN薄膜基地。

Ibidi載玻片可以用適于將LCC模式收集器的整個(gè)范圍內(nèi)進(jìn)行組合。另一個(gè)無污染選擇變體是所謂的滑棧（圖9a，9b），由2 Ibidi滑動(dòng)布置在彼此的頂部在夾層技術(shù)。細(xì)胞從這種疊落解剖由重力作用直接進(jìn)入下一個(gè)較低Ibidi滑動(dòng)，其被固定在一個(gè)特殊的堆疊保持件（圖9a，9b）。隨后恢復(fù)耕種是可能的。

的匹配帽提供進(jìn)一步污染保護(hù)選項(xiàng)。

圖9A：2 Ibidi載玻片在彼此的頂部構(gòu)成載玻片棧提供與激光顯微切割另一無污染選擇選項(xiàng)。 圖9B：作為收藏家的LOC持有人Ibidi載玻片。

Ibidi載玻片也可以用來作為收集裝置結(jié)合的萬向支架作為LOC裝置（見上文）。

表1：膜載玻片和培養(yǎng)皿激光顯微切割 - 切割性能，取決于膜型，膜支撐，物鏡用過的比較。激光顯微切割性能： - 不適合; +滿意; ++好; +++非常好。aThese物鏡具有改善的光學(xué)系統(tǒng)中具有最佳的圖像質(zhì)量相結(jié)合UV光傳輸。D代表校正環(huán)的位置。

表1：膜載玻片和培養(yǎng)皿激光顯微切割 - 切割性能，取決于膜型，膜支撐，物鏡用過的比較。激光顯微切割性能： - 不適合; +滿意; ++好; +++非常好。aThese物鏡具有改善的光學(xué)系統(tǒng)中具有最佳的圖像質(zhì)量相結(jié)合UV光傳輸。D代表校正環(huán)的位置。