尼康顯微鏡藍色激發(fā)塊B-1A（長波輻射）
尼康顯微鏡藍色激發(fā)塊B-1A（長波輻射）
尼康B-1A熒光激發(fā)塊組是為了最大限度地減少自體熒光和光漂白設(shè)計具有窄通帶激發(fā)范圍（20納米）。為紫外激發(fā)塊組合，可見光和近紅外透射光譜曲線是在圖1的長通屏障下面示出（發(fā)射）激發(fā)塊是能夠從具有顯著吸收在上部青綠色，黃色和紅色熒光發(fā)射信號的波長區(qū)域。類似于在此系列的其它的激發(fā)塊，所述的B-1A具有長通二色鏡具有一個切口上的505納米的波長。
藍色激發(fā)塊座B-1A產(chǎn)品規(guī)格：
激發(fā)波長篩選： 470-490納米（帶通，480 CWL）
雙色鏡截止波長： 505納米（長通，LP）
屏障過濾波長： 520納米截止點（長通，LP）
包含在該長通發(fā)射濾光片B-1A組合傳輸速度要比任何顯著更多的信號E -系列激發(fā)塊套，其中利用帶通發(fā)射濾光片，但20納米激發(fā)帶寬是最窄的尼康顯微鏡藍色激發(fā)/長通發(fā)射濾光片收藏。其結(jié)果是，從圖像中的B-1A激發(fā)塊組合都不亮如那些與生產(chǎn)B-2A和B-3A。在一般情況下，然而，具有長通發(fā)射濾光片的藍激發(fā)濾光片組合產(chǎn)生比它們的帶通（發(fā)射激發(fā)塊）對口相當(dāng)亮的圖像，但通常在低得多的信號-噪聲比為代價（導(dǎo)致更輕的背景）。在黃色，橙色的熒光發(fā)射，和紅色區(qū)域是在使用收集的圖像經(jīng)?？梢?strong>B-1A激發(fā)塊組合（參見圖2）。
所述B-1A激發(fā)塊組合被設(shè)計為最大化時結(jié)合有染液采用如碘化丙啶（由藍色光（包括熒光素和Alexa Fluor 488）激發(fā)流行熒光染料的發(fā)光的PI）或四甲基羅丹明異硫氰酸酯（TRITC）。這組也正在研究以下熒光團時，建議：Acridine Orange, Acridine Yellow, Auramine O, 5-carboxyfluorescein ( 5-FAM ), Alexa Fluor 488, BODIPY FL, Calcein, Calcein Green-1, coriphosphine O, Cy2, DiO, fluorescein isothiocyanate ( FITC ), Fluo-3, FluoroJade, FluorX, FM 1-43, LysoTracker Green, MitoTracker Green, Oregon Green derivatives, oxacarbocyanine 染料 (例如 DiO ), RH 414, Rhodamine 110, Spectrum Green, SYTO, SYTOX Green, YOYO-1, and YO-PRO-1.。在圖2中呈現(xiàn)的圖像表明具有多種針對不同細胞內(nèi)位置藍色吸收熒光探針的這種激發(fā)塊組合的性能。
示于圖2（a）是從大鼠袋鼠的培養(yǎng)物（熒光發(fā)射強度PTK2）上皮細胞進行免疫熒光標(biāo)記與初級抗牛阿爾法隨后的山羊抗小鼠β-微管蛋白的小鼠單克隆抗體的Fab綴合的Alexa Fluor片段488.最大吸收的Alexa Fluor 488的是495納米，并且最大發(fā)射發(fā)生在519納米。需要注意的是在整個細胞質(zhì)中延伸的細胞內(nèi)微管網(wǎng)絡(luò)的突出染色。另外，將試樣同時染色核蛋白質(zhì)CDC6（偶聯(lián)至太平洋藍），以及用于F-肌動蛋白與鬼筆環(huán)肽從紅綴合的Alexa Fluor 568注信號的存在（的Alexa Fluor 568）的熒光團，但沒有來自藍色（太平洋藍）探針，其是不能有效地激發(fā)在由該激發(fā)塊組合使用的波 長的熒光發(fā)射的。
圖2（b）說明了的性能的B-1A使用被標(biāo)記SYTOX綠染色的染色質(zhì)在核印度麂細胞的培養(yǎng)物過濾組合。最大吸收的SYTOX Green是504納米，并且最大發(fā)射發(fā)生在523納米。另外，將試樣同時標(biāo)記與初級抗人氧化磷酸化復(fù)合物V抑制蛋白的小鼠單克隆隨后的山羊抗小鼠抗體的Fab偶聯(lián)于太平洋藍（最大吸收在410納米）的片段。肌動蛋白細胞骨架網(wǎng)絡(luò)也被標(biāo)記鬼筆環(huán)肽綴合的Alexa Fluor 568注微弱信號電平的存在下從紅色（的Alexa Fluor 568）熒光團。（奧林巴斯顯微鏡）
小鼠腸的薄切片染色的Alexa Fluor 568鬼筆標(biāo)本（絲狀肌動蛋白; 600納米排放）和SYTOX綠色（核; 504納米激發(fā)和523納米的排放）是在圖2（c）所示。注意背景噪聲相比于其他尼康長通激發(fā)塊的組合（低級別的B-2A和B-3A），和顯著量的Alexa Fluor 568顯示的圖像中所產(chǎn)生的紅信號。圖2（d）表示的HeLa上皮細胞進行免疫熒光標(biāo)記的同隨后的山羊抗小鼠初級抗OXPHOS復(fù)合V抑制蛋白的單克隆抗體（小鼠）的Fab綴合的Alexa Fluor 488的吸收最大值的Alexa Fluor 488是495的片段納米，并且最大發(fā)射發(fā)生在519納米。另外，將試樣同時染色綴合鬼筆環(huán)肽F-肌動蛋白的Alexa Fluor 568（紅色），以及用于DNA用4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）。注意信號的來自紅色和綠色熒光，但由于沒有從DAPI，任何顯著發(fā)光強度是不能有效地激發(fā)的藍色波長區(qū)域的存在。
從染色的BODIPY FL phallacidin，其結(jié)合細胞內(nèi)絲狀肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)牛肺動脈血管內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)物的熒光發(fā)射強度，在圖2（e）中示出。最大吸收BODIPY FL的是503納米，并且最大發(fā)射發(fā)生在512納米。另外，將試樣同時用DAPI染色（在細胞核靶向DNA;藍色發(fā)光）和MitoTracker RED CMXRos（靶向線粒體;紅色發(fā)光）。注意信號從紅色熒光團（MitoTracker）的存在，但不存在藍色熒光從DAPI，這是不能有效地激發(fā)在此光譜區(qū)域。
示于圖2（F）是由薄麥粒的部分（自體熒光的發(fā)光強度小麥）的組織。在植物組織中的內(nèi)源性的自發(fā)熒光產(chǎn)生于各種生物分子，包括葉綠素，β-胡蘿卜素，葉黃素和。在藍色區(qū)域，葉綠素具有吸收帶，具有高消光系數(shù)，并產(chǎn)生一個顯著量熒光在與420和460納米之間的波長激發(fā)。注意頻譜滲出通過從自體熒光發(fā)射在黃色和紅色光譜區(qū)域與存在的B-1A激發(fā)塊的組合。