尼康顯微鏡雙色激發(fā)塊FITC-TRITC
尼康顯微鏡雙色激發(fā)塊FITC-TRITC
紫外線和尼康雙波段激發(fā)和發(fā)射的FITC-TRITC濾波器組合可見光透射光譜曲線下面示于圖1.該過濾器組被設(shè)計(jì)用于傳統(tǒng)的異硫氰酸熒光素的*佳檢測素（FITC）及四甲基羅丹明異硫氰酸酯（TRITC）探針組合，以及其它熒光團(tuán)具有類似的吸收光譜和發(fā)射光譜。 雙激發(fā)干涉濾波器集成了一個(gè)激發(fā)濾光器具有窄通帶的窗口，在藍(lán)（475至490納米），綠色（540至565納米）的頻譜區(qū)。 雙發(fā)射（屏障）濾波器的帶通區(qū)域能夠同時(shí)從兩個(gè)熒光檢測的綠色和橙紅色的發(fā)射。 傳輸和每個(gè)過濾器的反射帶，并且應(yīng)用具有選擇為互補(bǔ)的發(fā)射和激發(fā)波長的兩個(gè)帶通透射區(qū)域（多色）一個(gè)二色鏡之間的尖銳過渡，允許雙波段信號檢測以*小的干擾。
雙激發(fā)濾波器模塊FITC-TRITC產(chǎn)品規(guī)格：
激發(fā)波長篩選：475-490納米（帶通，483 CWL）和540-565納米（帶通，553 CWL）
多色鏡波長：500-540納米（帶通）和575-660納米（帶通）
屏障過濾波長：503-530納米（帶通，517 CWL）和580-620納米（帶通，600 CWL）
在FITC-TRITC雙波段熒光濾波器組合被用于同時(shí)檢測的熒光染料FITC和TRITC與頻帶之間的*小串?dāng)_的專門設(shè)計(jì)的，并且可以與其他對具有相似光譜分布的熒光探針的使用。 當(dāng)試樣被照亮用水銀弧光放電燈中，546納米線是理想的TRITC激發(fā)。 過濾器設(shè)置的較短波長信道將選擇狹義的光譜區(qū)域?yàn)樗{(lán)色激發(fā)和綠色發(fā)光檢測，而較長的波長成分對應(yīng)綠色激發(fā)和橙紅色發(fā)光檢測。 研究以下的熒光團(tuán)的各種組合時(shí)，此濾波器組建議：FITC，綠色熒光蛋白（GFP和EGFP），的Cy2，或的Alexa Fluor 488（藍(lán)色激發(fā)），配對TRITC，Cy3的紅色熒光蛋白（DsRed ），或的Alexa Fluor 546和568（綠色激發(fā)）。 在圖2中呈現(xiàn)的圖像表明具有多種針對不同細(xì)胞內(nèi)位置的熒光探針對這個(gè)濾波器組合的性能。
如圖2（a）是從染色的MitoTracker紅CMXRos和BODIPY FL phallacidin牛肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，其靶向細(xì)胞內(nèi)的線粒體的網(wǎng)絡(luò)和細(xì)胞骨架的肌動(dòng)蛋白絲，分別培養(yǎng)的熒光發(fā)射強(qiáng)度。 *大吸收MitoTracker紅CMXRos的是579納米，并且*大發(fā)射發(fā)生在599納米，而對于BODIPY FL的相應(yīng)值是503和512納米。 另外，將試樣同時(shí)用DAPI染色（在細(xì)胞核靶向DNA;藍(lán)色發(fā)光）。 注意沒有來自藍(lán)色（DAPI）熒光信號，但明亮的橙黃色熒光由管狀線粒體展出，并從肌動(dòng)蛋白絲在細(xì)胞質(zhì)中的綠色發(fā)光。
小鼠腸的薄膜部沾上Alexa Fluor 350麥胚凝集素，藍(lán)色熒光的凝集素特定于杯狀細(xì)胞的粘液示于圖2（b）。 另外，將試樣同時(shí)沾上的Alexa Fluor 568鬼筆環(huán)肽（絲狀肌動(dòng)蛋白; 600納米發(fā)射）和SYTOX綠（核; 504納米激發(fā)和523納米發(fā)射）。 請注意沒有從藍(lán)色熒光（Alexa Fluor 350）的信號，但在核組織標(biāo)本，由于SYTOX綠色的明亮的綠色熒光，和肌動(dòng)蛋白的刷狀緣的橙紅色熒光。（奧林巴斯顯微鏡）
如圖2（c）展示了在中國倉鼠卵巢（CHO線），該轉(zhuǎn)染含有互補(bǔ)DNA到THY-1，駐留在高爾基體小糖蛋白的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）載體的細(xì)胞的培養(yǎng)熒光發(fā)射。 該細(xì)胞系表達(dá)了主要定位于高爾基體，而且也分布到囊泡整個(gè)細(xì)胞質(zhì)EGFP-THY-1的嵌合蛋白質(zhì)。 將試樣標(biāo)有一些額外的探頭，包括MitoTracker紅CMXRos（針對線粒體;紅色熒光）和DAPI（針對核;藍(lán)色熒光）。 注意在包圍核，這是缺乏的藍(lán)色熒光從DAPI與該過濾器相結(jié)合的區(qū)域的高爾基體的突出綠色染色。 在細(xì)胞質(zhì)囊泡還呈現(xiàn)綠色熒光，但在較小的程度比見于高爾基。 此外，從MitoTracker染料而產(chǎn)生的橙紅色熒光是在線粒體網(wǎng)絡(luò)清晰可見。
熒光薄小鼠腎臟的部分沾上多個(gè)（3）的熒光團(tuán)是在圖2（d）所示。 在組織切片細(xì)胞核靶向與核酸探針的DAPI，當(dāng)在細(xì)胞培養(yǎng)物和組織切片結(jié)合到DNA，其具有*大激發(fā)在358納米，并且具有發(fā)射*大值在461納米。 另外，低溫恒溫器部也同時(shí)沾上的Alexa Fluor 488麥胚凝集素（腎小球和曲小管; 519納米發(fā)射）和Alexa Fluor 568鬼筆環(huán)肽（絲狀肌動(dòng)蛋白和刷狀緣）。注意信號的同時(shí)從綠色（Alexa Fluor 488）和紅色（Alexa Fluor 568）的探針，但由于沒有藍(lán)色熒光由于DAPI，這是由該過濾器組合抑制的存在。
牛肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)即進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記的同隨后山羊綴合BODIPY FL抗小鼠Fab片段初級抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體，圖2（e）中示出。 將細(xì)胞培養(yǎng)物同時(shí)沾上德克薩斯紅鬼筆環(huán)肽和DAPI，靶向的細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)和DNA在細(xì)胞核中，分別。 *大吸收BODIPY FL的是505納米，并且*大發(fā)射發(fā)生在513納米，而對于德克薩斯紅的相應(yīng)值是595和620納米。 注意沒有來自藍(lán)色（DAPI）熒光信號，但明亮的紅色熒光通過在細(xì)胞質(zhì)的肌動(dòng)蛋白絲，并從微管網(wǎng)絡(luò)的綠色發(fā)射表現(xiàn)。
從石松球果（ 伸筋草 ）自發(fā)熒光發(fā)射強(qiáng)度薄部分體現(xiàn)在圖2（F）。 在植物組織中的內(nèi)源性的自發(fā)熒光產(chǎn)生于各種生物分子，包括葉綠素，β-胡蘿卜素，葉黃素和。 在藍(lán)色和綠色的激發(fā)區(qū)域，葉綠素具有吸收帶，具有高消光系數(shù)，并產(chǎn)生一個(gè)顯著量熒光在與450和550納米之間的波長激發(fā)。 對于以上所示的球桿苔蘚組織，注意自發(fā)熒光發(fā)射強(qiáng)度中的綠色和紅色光譜區(qū)域的存在，這是尼康FITC-TRITC熒光濾波器組合的特性。