尼康顯微鏡綠色激發(fā)塊

尼康顯微鏡綠色激發(fā)塊

包括在尼康綠色激發(fā)熒光激發(fā)塊組合是6包含任一的帶通或長(zhǎng)通發(fā)射（阻擋）濾波器能夠通過任一窄或?qū)挼狞S色，橙色的頻帶選擇性地分離的熒光發(fā)射，紅和近紅外小心平衡組合光譜區(qū)。這個(gè)交互式指南探討了變化的激發(fā)和發(fā)射濾光器的光譜分布，以及這些的二色鏡，如何影響的信號(hào)電平，整體過濾器的性能，并在設(shè)計(jì)用于在綠色區(qū)域的熒光團(tuán)的激發(fā)的組合圖像的對(duì)比度。

教程初始化與隨機(jī)選擇的熒光檢體中出現(xiàn)的標(biāo)本圖像窗口和帶通發(fā)射（Cy3標(biāo)記 ;在所顯示的綠色激發(fā)濾光片組合頻譜輪廓缺省）濾波器組譜概況圖。將合并的過濾器的透射和反射光譜被疊加在用于標(biāo)記的樣品（熒光光譜曲線中不包含自身熒光植物標(biāo)本）的吸收綠色熒光團(tuán)的吸收光譜和發(fā)射光譜。熒光團(tuán)的吸收光譜示于使用褐色填充的教程，而相應(yīng)的發(fā)射光譜表示用灰色填充。由指定的過濾器組合的波長(zhǎng)特性過濾器設(shè)置滑塊將顯示在本教程的右下角的角落的黃色框。這些值被不斷地更新作為滑板平移由左到右。

為了操作的教程，使用過濾器設(shè)置滑塊可用于綠色激發(fā)各種過濾器組合之間進(jìn)行轉(zhuǎn)換。當(dāng)滑塊從左向右平移，激發(fā)和阻擋濾光片的光譜分布，以及該二色鏡的，被修飾以模擬變化的光譜圖。需要注意的是連續(xù)變化的光譜曲線，但并不意味著任何過濾器的組合是可能的，也不是單獨(dú)的過濾器設(shè)置可變的（無(wú)物理變化的過濾器）的問候的光譜曲線。的選擇的濾波器組之間的頻譜分布的變化簡(jiǎn)單地用來幫助建立在每個(gè)光學(xué)塊中使用的過濾器的組合之間的關(guān)系。

個(gè)別過濾光譜（激發(fā)，發(fā)射和二色鏡），可以添加或刪除的過濾器設(shè)置光譜范圍選擇或取消選擇相應(yīng)的復(fù)選框，圖形下方的曲線圖。此外，該熒光團(tuán)的吸收光譜和發(fā)射光譜可以被添加或與一組類似的復(fù)選框（除去譜截面）。檢體圖像同時(shí)改變與過濾器配置文件以反映變化由改變到由滑塊的翻譯所產(chǎn)生的過濾器的組合產(chǎn)生的對(duì)比度和信號(hào)電平。新的標(biāo)本可以在任何時(shí)候選擇使用選擇的樣本下拉菜單，用來標(biāo)記選定樣本的熒光基團(tuán)直接列在菜單框下方。在許多情況下，將樣品粘有兩個(gè)或更多的熒光探針以證明熒光帶通和長(zhǎng)通屏障（發(fā)射）過濾套的選擇性分離。

尼康綠色熒光濾光片組合包括510和560納米的帶10，25，30，和50納米的通帶寬度輪廓（包括窄，中，寬激發(fā)帶）之間的激發(fā)波長(zhǎng)范圍內(nèi)。三組合的使用相同的二色鏡（565納米），而其它三個(gè)具有較高的波長(zhǎng)截止點(diǎn)的值（570或575納米）的反射鏡。兩個(gè)六種尼康綠色激發(fā)濾光片套結(jié)合帶通阻濾波器具有60和75納米的帶寬。

兩者的尼康綠色激發(fā)濾光片套結(jié)合的帶通發(fā)射（阻擋）濾波器旨在減少或消除從熒光團(tuán)發(fā)射紅光或近紅外光譜區(qū)中的樣品標(biāo)記有多個(gè)探針的干擾。在G-2E / C組結(jié)合了狹窄的激發(fā)帶（25納米）與60納米的發(fā)射帶通。Cy3標(biāo)記的組合（尼康的成員HYQ濾波器組）包括類似的組件，但具有更寬的帶通的激發(fā)和發(fā)射濾波器（30和75納米，分別地），并用二色鏡切口上的570納米的波長(zhǎng)相比為565納米的價(jià)值G-2E / C組。既利用帶通發(fā)射濾波器的套適于與四甲基羅丹明異硫氰酸酯（用TRITC）和Cy3標(biāo)記，具有590-650納米的帶通范圍內(nèi)的G-2E / C組和573-648納米的Cy3標(biāo)記的組合。使用所產(chǎn)生的圖像的Cy3組具有更多的黃色外觀，體現(xiàn)的發(fā)射帶通到較低的波長(zhǎng)的擴(kuò)展，并且圖像是明亮一些由于從更寬的帶通值產(chǎn)生的更大的激發(fā)和發(fā)射能量。

在尼康顯微鏡的G-1A和G-1B濾波器組合具有非常相似的光學(xué)元件，并且可以被認(rèn)為是本質(zhì)上可互換的。其主要應(yīng)用是汞弧光放電燈供選擇的546納米的綠光發(fā)射線。兩者都配備有窄10納米的通帶激發(fā)濾波器（541-551納米），以盡量減少自體熒光，但在他們的二色性反射鏡和屏障（發(fā)射）濾波器的截止點(diǎn)的波長(zhǎng)有所不同。在G-1A組有二色鏡切對(duì)575納米的波長(zhǎng)，加上580納米（切上）的發(fā)射濾波器。在G-1B濾波器組采用低波長(zhǎng)二色鏡（565納米）中有較高的發(fā)射波長(zhǎng)過濾器（590納米）的組合。鏡和發(fā)射濾光片波長(zhǎng)值之間的增加的波長(zhǎng)間隔為G-1B組相比，G-1A可能導(dǎo)致與一些熒光染料顯著圖像的差異。此外，較高的發(fā)射濾波器切上不包括黃色的波長(zhǎng)和導(dǎo)致更偏紅的圖像外觀上與G-1B濾波器的組合。

考慮到標(biāo)準(zhǔn)的綠色激發(fā)濾光片組中，G-2A采用組合激發(fā)濾波器，寬50納米的通頻帶（510-560納米），涵蓋最綠色的光譜區(qū)域。在長(zhǎng)通屏障過濾器通過從一個(gè)大的范圍內(nèi)，在波長(zhǎng)超過590納米的截止點(diǎn)發(fā)出（橙色通過近紅外線）的熒光發(fā)射。在所用的二色鏡的G-2A組具有565納米的截止波長(zhǎng)。類似的過濾器設(shè)置，G-2B組合采用相同的激發(fā)濾光片（50納米帶通）作為G-2A，但有一個(gè)10納米的波長(zhǎng)更長(zhǎng)的二色鏡切割上（575納米），再加上一個(gè)長(zhǎng)通屏障過濾器是由20納米偏向紅色光譜區(qū)域，以610納米。與所產(chǎn)生的圖像的G-2B組具有比從較暗的背景的G-2A，并且還出現(xiàn)更偏紅由于增加了排放切口上的波長(zhǎng)，其中不包括更黃橙色發(fā)光。

• G-1A -G-1A為綠色波長(zhǎng)的激發(fā)濾光器的組合被設(shè)計(jì)為具有窄的激發(fā)帶通，以減少自發(fā)熒光和最小化樣品的輻射暴露。的長(zhǎng)通屏障（發(fā)射）濾波器能夠從黃色，橙色和紅色發(fā)射具有在中心的綠色波長(zhǎng)區(qū)域顯著吸收熒光團(tuán)發(fā)射的信號(hào)。

• G-1B -G-1B濾鏡組合也有類似的組件配置文件的G-1A組，結(jié)合了狹窄的激發(fā)帶通，以減少自體熒光和試件破壞，但具有不同的二色鏡和發(fā)射濾波器截止波長(zhǎng)上。切到更長(zhǎng)的波長(zhǎng)的發(fā)射濾波器的移位產(chǎn)生的，由于黃色發(fā)射的增加的阻擋出現(xiàn)偏紅的圖像。

• G-2A -G-2A濾波器組合被配置為在標(biāo)準(zhǔn)的綠色過濾器塊中，具有寬的激發(fā)帶通應(yīng)用到大量的熒光團(tuán)通過綠色波長(zhǎng)激活的。的長(zhǎng)通發(fā)射濾波器允許檢測(cè)所有熒光波長(zhǎng)長(zhǎng)于黃色光譜區(qū)域。

• G-2B -G-2B濾波器組合設(shè)計(jì)具有相同的勵(lì)磁特性的G-2A濾波器模塊。然而，較高的二色鏡和發(fā)射濾波器截止波長(zhǎng)上，在G-2B組產(chǎn)生具有較深的背景和顏色轉(zhuǎn)向紅色的圖像。

• G-2E / C -G-2E / C濾波器組合設(shè)計(jì)與許多流行的熒光探針是在多標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中使用的最佳性能。一條狹窄的激發(fā)帶通提供了選擇性激勵(lì)，而帶通濾波器的排放減少了從熒光發(fā)射紅光和近紅外干擾。

• Cy3（HYQ） -該Cy3的綠色激發(fā)濾光片組合在結(jié)構(gòu)上類似G-2E / C組。然而，在一個(gè)較寬的激勵(lì)頻帶的發(fā)射帶通和展寬到包括低波長(zhǎng)的光，通過所產(chǎn)生的圖像的Cy3過濾塊在某種程度上更明亮，反射更多的黃色光譜區(qū)發(fā)射的檢測(cè)。