尼康顯微鏡紫外激發(fā)塊組
尼康顯微鏡紫外激發(fā)塊組
包括在尼康顯微鏡紫外線激發(fā)熒光濾波器圖集四個包含任一的帶通或長通發(fā)射（阻擋）能夠通過任一窄或寬的藍色，綠色和紅色的可見光波長區(qū)域中，選擇性分離熒光發(fā)射濾光片小心平衡組合。這些過濾器的組合包括330和380納米的帶10的通帶寬度分布，40，和50毫微米之間的激發(fā)波長范圍內。三組合的采用相同的二色鏡，而第四組具有較低的波長切于一個反射鏡，用它的較窄的激發(fā)帶重合。紫外線過濾套包含任長通或帶通單發(fā)射濾光片。
紫外線過濾器集的性能可以通過從與每個個體濾光片組合的捕獲的同一視場的圖像進行比較來判斷，如圖1所示的檢體是從小鼠腎臟獲得的并用薄的冷凍切片的組織切片（16微米）三種熒光團的組合。腎小球的薄款元素和曲小管被標記的Alexa Fluor488（綠色發(fā)光），麥胚凝集素。絲狀肌動蛋白居住在腎小球和刷狀緣染色的Alexa Fluor568（紅色發(fā)射）鬼筆環(huán)肽，而在細胞核中的DNA counterstained用DAPI（藍色發(fā)光），從而完善了標識制度。
在尼康紫外線激發(fā)一系列的孤帶通濾波器的發(fā)射，在UV-2E/ C，產生在漆黑的背景，深藍色的彩色圖像（圖1（a）），并非常適用于多色熒光成像使用與其他激發(fā)塊組合。在UV-2E/ C組合的帶通發(fā)射濾波器消除了熒光，從紅色和綠色的熒光團在樣品標記有多個探針。在UV-1A濾波器組合（圖1（b））中包含一個很窄的激發(fā)帶（10納米），其與由普通電弧放電燈所產生的汞i線（365納米）的波長一致。該過濾器組合的目的是通過一個窄帶通激發(fā)區(qū)域盡量減少自體熒光，同時通過了所有的發(fā)射波長*過420納米。在UV-1A濾波器組中的二色鏡具有*短的截止波長（380納米）的紫外線系列。
通常被稱為標準的紫外組中，UV-2A組合配有50納米的帶通濾波器激勵覆蓋*長波長紫外區(qū)域的。 耦合到一個400納米的截止二色鏡和一個長通發(fā)射濾波器中，UV-2A產生的任何過濾器組合的*亮的圖象在Nikon紫外線集（圖1（c））。 在UV-2B是在配置文件中的UV-2A相似，但配備有一個較長的切口上波長（紅移由15納米）的屏障過濾器，以減少背景熒光。 時相比，UV-2A（圖1（c）和圖1（d）），在UV-2B產生暗得多的背景與**的整體圖像的對比度。 規(guī)格從各種尼康紫外濾光片組合的二色性反射鏡和過濾器都列在表1中。
尼康紫外線過濾組合規(guī)格
濾鏡套裝 描述 | 激發(fā)濾光片（nm） | 雙色鏡 (nm) | 屏障過濾 (nm) | 備注 |
UV-1A | 365/10 | 380 (LP) | 420 (LP) | Narrow Excitation Band |
UV-2A | 355/50 | 400 (LP) | 420 (LP) | Standard UV Cube |
UV-2B | 355/50 | 400 (LP) | 435 (LP) | Darker Background |
UV-2E/C | 360/40 | 400 (LP) | 460/50 | Medium Excitation Band |
表1
UV-2E/C - 在UV-2E/ C濾波器組合設計為紫外熒光銳截止濾波器模塊。過濾器是軟涂敷型旨在產生高信/噪比。在這種組合中使用的窄帶通阻擋濾波器被設計為顯著地減少或完全消除綠色和紅色可見光的波長。
UV-1A - UV-1A組合被設計為紫外熒光具有窄的激發(fā)帶通（僅第 i -line汞光譜的利用）和窄的二色鏡的通帶，其*小化的自體熒光和光漂白濾波器塊。
UV-2A -在 UV-2A濾波器組合設計為紫外熒光標準的過濾塊，是*亮的紫外線過濾器尼康調色板設置。
UV-2B - UV-2B的組合被設計成用于紫外熒光，提供了一個更暗的背景和比UV-2A濾波器組合更好的對比度的通用濾波器塊。
熒光團的寬陣列已經開發(fā)出用激發(fā)波長范圍從紫外區(qū)域的調查。 Catalogued表2是一些*流行的染料和熒光探針可以與尼康紫外線過濾器的組合來可視化的。 本地化的環(huán)境顯著影響熒光團的吸收光譜和發(fā)射光譜的*大值（峰值）波長的光，因此在表2中給出的值可能與實驗條件而變化。 此列表僅旨在作為濾波器和熒光基團的選擇的引導，而不應被認為是詳盡的或窮盡的匯編。 許多包含在表2中的熒光探針是專有的，已經開發(fā)了以*小化，同時確保了熒光染料的吸收和發(fā)射光譜以及普通熒光濾光器的組合之間的*大程度的重疊光漂白。 注意，由于寬的吸收和發(fā)射帶，數在表2中列出的熒光探針也適合于與具有紫色和藍紫色激發(fā)帶通區(qū)域的過濾器組合使用。
熒光紫外激發(fā)光譜曲線
熒光染料 | 激發(fā)波長（納米） | 發(fā)射波長 (納米) | 推薦的濾波器組合(s) |
Acridine Blue | 362 | 462 | UV-2A, UV-2B |
AFA (Acriflavin Feulgen SITSA) | 355-425 | 460 | UV-2A, UV-2B |
Alexa Fluor 350 | 346 | 442 | UV-2A, UV-2B |
Alexa Fluor 405 | 401 | 421 | UV-2A, UV-2B |
AMCA (Aminomethylcoumarin Acetic Acid) | 345 | 445 | UV-2A, UV-2B |
AMCA-X (AMCA Succinimidyl Ester) | 353 | 442 | All |
Aminoquinoline | 355 | 550 | UV-1A, UV-2A |
Aniline Blue | 370 | 509 | UV-1A, UV-2A |
ANS (Anilinonaphthalene Sulfonic Acid) | 372 | 455 | All |
Anthroyl Stearate | 371 | 446 | All |
BAO 9 (Bisaminophenyloxadiazole) | 365 | 395 | UV-1A, UV-2A |
BFP (Blue Fluorescent Protein) | 380 | 440 | All |
Bisbenzamide | 360 | 605 | UV-2A, UV-2B |
Blancophor SV | 370 | 435 | All |
Blue FluoSpheres | 350 | 440 | All |
Blue FluoSpheres (Short Wavelength) | 365 | 415 | UV-1A, UV-2A |
Calcein Blue | 370-375 | 420-435 | All |
Calcofluor RW | 370 | 440 | All |
Calcofluor White (Standard Solution) | 365 | 435 | All |
Cascade Blue | 370 | 425 | UV-1A, UV-2A |
Cascade Yellow | 402 | 545 | UV-1A, UV-2A |
CCF2 (GeneBLAzer) | 402 | 520 | UV-1A, UV-2A |
CellTracker Blue Dyes | 354-372 | 466-470 | All |
CPM Probes (Maleimide Coumarins) | 375-385 | 460-475 | All |
DANS (Dimethylaminonaphthalene) | 340 | 525 | UV-2A, UV-2B |
DANSA (Diamidinonaphthyl Sulfonic Acid) | 360 | 430 | UV-1A, UV-2A |
Dansyl Probes | 335-380 | 475-575 | All |
DAPI (Diamidinophenylindole) | 358 | 461 | All |
Dapoxyl Probes | 375-400 | 575-600 | UV-1A, UV-2A |
DIDS (Diisothiocyanatostilbene Disulfonic Acid) | 341 | 415 | UV-1A, UV-2A |
Dimethylamino Sulfonic Acid | 340 | 520 | UV-2A, UV-2B |
DIPI (Bisimidazolinylphenylindole) | 364 | 455 | UV-2A, UV-2B |
Dopamine | 340 | 490-520 | UV-2A, UV-2B |
DPH (Diphenylhexatriene) | 350 | 452 | UV-2A, UV-2B |
ELF-97 Alcohol | 345 | 530 | UV-2A, UV-2B |
EBFP (Enhanced Blue FP) | 380 | 440 | All |
ERTracker Blue/White DPX | 374 | 575 | UV-2A, UV-2B |
Fast Blue | 360 | 410 | UV-1A, UV-2A |
Flazo Orange | 375-530 | 612 | UV-1A, UV-2A |
Fluorescamine | 390 | 460-475 | UV-2A, UV-2B |
FluoroGold (Hydroxystilbamidine) | 365 (High pH) | 565 (High pH) | All |
Fura-2 | 335 (High Ca) | 505 (High Ca) | UV-2A, UV-2B |
GFP (Blue Shifted, Y66H) | 382 | 448 | UV-2A, UV-2B |
GFP (Wild Type) | 395 | 508 | UV-1A, UV-2A |
Gloxalic Acid | 405 | 460 | UV-2A, UV-2B |
Granular Blue | 355 | 425 | UV-1A, UV-2A |
Hoechst 33258 | 346 | 460 | All |
Hoechst 33342 | 347 | 483 | All |
Hoechst 34580 | 392 | 440 | All |
HPTS (Hydroxypyrene Trisulfonic Acid) | 355 | 465 | All |
Hydroxymethylcoumarin | 360 | 455 | All |
HAT (Hydroxytryptamine) | 370-415 | 520-540 | All |
IAEDANS | 336 | 482 | UV-2A, UV-2B |
Indo-1 | 330 (High Ca) | 405 (High Ca) | All |
Intrawhite CF | 360 | 430 | UV-1A, UV-2A |
Laurdan | 364 | 497 | All |
Leucophors | 370-395 | 430-465 | All |
LysoSensor Blue | 373 | 425 | UV-1A, UV-2A |
LysoSensor Yellow/Blue | 329 (High pH) | 440 (High pH) | UV-1A, UV-2A |
LysoTracker Blue | 373 | 422 | UV-1A, UV-2A |
MAG Probes (Magnesium Indicators) | 330-350 | 420-505 | UV-2A, UV-2B |
Marina Blue | 365 | 460 | All |
Methoxycoumarins | 340-365 | 400-470 | All |
Monochlorobimane | 380 | 461 | UV-2A, UV-2B |
MPS (Methyl Green Pyronine Stilbene) | 364 | 395 | UV-1A, UV-2A |
Noradrenaline | 340 | 505 | UV-2A, UV-2B |
Nuclear Fast Red | 289-530 | 580 | UV-1A, UV-2A |
Nuclear Yellow | 365 | 495 | UV-1A, UV-2A |
OPT (o-Phthalaldehyde) | 340 | 455 | UV-2A, UV-2B |
PBFI (Potassium Probe) | 334 (High K) | 525 (High K) | UV-2A, UV-2B |
Phorwites | 360-380 | 430 | All |
PMIA (Pyrenemethyl Iodoacetate) | 341 | 376 | UV-1A |
Prodan | 361 | 498 | All |
Pyrene | 345 | 378 | UV-1A |
Pyrozal Brilliant Flavin 7GF | 365 | 495 | UV-1A, UV-2A |
QDots 525-655 | 350-450 | 525-655 | UV-2A, UV-2B |
Quin-2 (Calcium Probe) | 332 (High Ca) | 492 (High Ca) | UV-2A, UV-2B |
SBFI (Sodium Probe) | 334 (High Na) | 525 (High Na) | UV-2A, UV-2B |
Serotonin | 365 | 530 | UV-2A, UV-2B |
SITS (Stilbene Isothiosulphonic Acid) | 337 | 436 | UV-2A, UV-2B |
SPQ (Methoxysulfopropylquinolinium) | 344 | 443 | UV-2A, UV-2B |
Stilbene | 335 | 440 | UV-2A, UV-2B |
Tetracycline | 390 | 560 | UV-2A, UV-2B |
Thioflavin TCN | 350 | 460 | UV-2A, UV-2B |
Thiolyte | 380 | 480 | All |
Tinopol CBS | 390 | 430 | UV-2A, UV-2B |
True Blue | 365 | 425 | UV-1A, UV-2A |
Uvitex SFC | 365 | 435 | All |
表2
雖然如上所述充分的多數用紫外線波長的調查服務的四個過濾器的組合，若干附加的特殊過濾器組可從廠家售后。 激發(fā)在250和300納米之間的波長區(qū)域的熒光團可使用過濾器的組合，包括集中在這個區(qū)域的帶通濾波器的激勵。 這些組合還需要二色鏡和屏障過濾器與切口對在紫外區(qū)域的波長（以及檢測器對紫外線敏感）。 設計用于氙弧放電燈激勵濾波器組包含集中在300到400納米的區(qū)域寬的帶通激發(fā)濾光片（約100納米）。
其他專門的過濾器組包含發(fā)射濾波器具有兩個帶通區(qū)域為離子敏感的探針，如Indo-1, FluoroGold, Fura-2，和LysoSensor染料的比率的分析。其他套結合的窄水銀i線（365納米）的帶通濾波器的激發(fā)帶的帶通發(fā)射濾波器專門用于染料如DAPI, Hoechst 33258量身定做（通過合并的UV-2E/ C和UV-1A組合的元素。生產），和AMCA。此外，已經開發(fā)了用于特定熒光團的濾波器的組合。間設計的芘這些組合，ELF-97，核固紅，SPQ，瀑布藍和金探針。有長通濾波器截止波長上的黃色光譜區(qū)域過濾器集是用于檢查殘留的光致抗蝕劑在半導體晶片上是有用的。