尼康顯微鏡相差板的標(biāo)本對(duì)比配置的影響

 環(huán)繞的傳輸延遲性能（衍射）中光通過相差顯微鏡相差板環(huán)能顯著影響整體標(biāo)本的對(duì)比觀察。這種互動(dòng)教程探討對(duì)比度變化引起的改變相板的吸收和遲滯特性。

與隨機(jī)選擇的樣本圖像出現(xiàn)在初始化教程相差對(duì)比圖像在右手側(cè)窗的教程。每個(gè)標(biāo)本用于本教程是比較厚的顯示器的對(duì)比度的影響是依賴于物鏡相差板配置。為了操作的教程，使用相差對(duì)比模式滑塊來改變，與一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的黑暗之間觀察到標(biāo)本對(duì)照（低DL）和高濃度（高密度的黑暗中（中性）DM）相差板。

當(dāng)滑塊轉(zhuǎn)換，相差環(huán)板（以上滑塊）變暗表明減少傳輸延遲性能，和許多標(biāo)本進(jìn)行對(duì)比的變化特征。在某些情況下，對(duì)比度反轉(zhuǎn)發(fā)生（通常表現(xiàn)在黑暗的地區(qū)出現(xiàn)更加明亮）出現(xiàn)在標(biāo)本相差對(duì)比圖像窗口。試樣的對(duì)比變化將滑塊同時(shí)產(chǎn)生，波的振幅圖，直接定位的相差板的上面，展示在環(huán)繞波振幅降低（紅色曲線）的變化相對(duì)于所得到的（或顆粒，綠色曲線）波。光的衍射波的振幅保持不變，不管的相差板的特點(diǎn)，是由藍(lán)色曲線表明。

在光傳輸和物鏡相板的延遲值的變化可以產(chǎn)生廣泛的影響，在非常低的對(duì)比度（接近明場(chǎng)照明）的一個(gè)偽暗視野的影響。對(duì)于大多數(shù)標(biāo)本，*好的結(jié)果介于兩個(gè)極端之間，對(duì)折射率和厚度的整個(gè)試樣脈動(dòng)值的亮度，平滑的灰度生產(chǎn)。此外，薄的標(biāo)本往往會(huì)以不同的方式比較厚的標(biāo)本，觀察時(shí)，在相同的延遲（或環(huán)繞波的進(jìn)步）和相差板的中性密度（傳輸衰減）值。

本教程比較常見的兩種物鏡相板構(gòu)型的影響。在低暗相差板（DL）規(guī)范是一個(gè)四分之一波長延遲值和中性密度平均水平的生產(chǎn)，導(dǎo)致試樣的對(duì)比，落在中間的范圍。DL物鏡產(chǎn)生淺灰色背景暗圖像的輪廓，并利用通用的相差對(duì)比觀察典型的物鏡。這些物鏡的物鏡是提供在與周圍介質(zhì)的折射率的一個(gè)主要區(qū)別標(biāo)本中*強(qiáng)的暗對(duì)比。DL相對(duì)比的物鏡是用于細(xì)胞和其他半透明的生活資料的審查*流行的款式，特別適合于顯微數(shù)字成像。

另外，中暗（DM）相差板配置有一個(gè)較小的環(huán)繞波的延遲值（約八分之一個(gè)波長），但更高的中性密度比暗低板。中暗的相差板生產(chǎn)中灰色背景暗圖像的輪廓。這些物鏡是設(shè)計(jì)用來與具有小的相移和折射率的差異的標(biāo)本實(shí)現(xiàn)高圖像對(duì)比度，如細(xì)纖維，鞭毛，纖毛，顆粒，和非常小的顆粒。通常限制在高放大倍率的物鏡具有大的數(shù)值孔徑（螢石和消色差透鏡），用非常薄的標(biāo)本進(jìn)行DM相對(duì)比，但往往顯示一個(gè)反轉(zhuǎn)的對(duì)比時(shí)，厚的樣品（標(biāo)本具有非常高的折射率）成像。

在相差顯微鏡下觀察圖像強(qiáng)度（或記錄或數(shù)字或與傳統(tǒng)的電影）不承擔(dān)一個(gè)簡(jiǎn)單的線性關(guān)系，對(duì)試樣的光學(xué)路徑差。這個(gè)概念是如圖1所示，它顯示相對(duì)試樣強(qiáng)度作為陽性對(duì)照的相差板有一個(gè)固定的延遲值的函數(shù)的相差變化（90度）和不同程度的中性密度。紅色曲線與中暗（DM）物鏡，而黃色曲線接近黑暗的低（DL）物鏡。藍(lán)色曲線提出了一種無中性密度相差板加，和模仿的明物鏡在90度的相差變化（見圖1）。標(biāo)本陷入圖1的灰色區(qū)域比背景暗，和那些在白色區(qū)域比背景更輕。

對(duì)比的是更大的在較小的光程差與具有較高的中性密度值的物鏡（紅色曲線；DM物鏡），但較厚的標(biāo)本進(jìn)行對(duì)比度反轉(zhuǎn)在低得多的路徑的差異（約50度延遲）。作為一個(gè)結(jié)果，解釋圖像可以用厚的樣品，當(dāng)采用暗介質(zhì)相對(duì)比的物鏡是困難的。例如，精細(xì)胞的纖毛具有折射率只比周圍介質(zhì)略高（約15度延遲）將出現(xiàn)深灰色。然而，較厚的特點(diǎn)，如細(xì)胞核或較大的細(xì)胞器，具有延遲值的百分之60左右，經(jīng)驗(yàn)對(duì)比反演和出現(xiàn)在黑暗的背景很亮。檢查時(shí)具有中性密度百分之25相差物鏡（黃色曲線），同一標(biāo)本有一個(gè)細(xì)胞核，比纖毛深。戲劇性的對(duì)比這些差異可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)完全不同的解釋。