顯微攝影，喜歡任何形式的攝影，是容易發(fā)生各種故障和錯(cuò)誤不管的顯微鏡設(shè)備或經(jīng)驗(yàn)水平和技能的顯微攝影復(fù)雜性。錯(cuò)誤必須仔細(xì)檢查識別的源碼，這通常是由于無論是設(shè)備故障，可憐的試樣制備技術(shù)，不當(dāng)，或處理錯(cuò)誤。
大多數(shù)攝影錯(cuò)誤可以追溯到奧林巴斯顯微鏡的光學(xué)結(jié)構(gòu)，包括調(diào)整不當(dāng)?shù)恼彰?，使用錯(cuò)誤的過濾器，或不正確的設(shè)置的聚光鏡和/或光圈。下一個(gè)最常見的問題的出現(xiàn)是由于較差的試樣制備和污垢，灰塵，油脂或污染的標(biāo)本或光學(xué)顯微鏡。圖1給出了一個(gè)照片的小麥銹病膿皰（由感染由真菌引起的柄銹菌幾種常見的錯(cuò)誤說明攝影）。本圖的中心部分（括在一個(gè)白色的圓圈）失去了焦點(diǎn)，和左上和右角上表現(xiàn)出的陰影從視場光闌和漸暈。在使用黑白電影攝影對比誤差在圖1的左下部分表示為一個(gè)地區(qū)顯示對比度的過濾器，導(dǎo)致在顯微圖像的對比度太差的選擇。球面像差焦點(diǎn)問題和試樣的細(xì)節(jié)和由于振動(dòng)，比較缺乏，污染油對物鏡鏡頭前說明在白色的圓圈在圖1的右側(cè)。也包括在顯微照片是錯(cuò)誤和粉塵污染的膜損傷。這些和其他類似的錯(cuò)誤，如標(biāo)本染色，太多或太厚的使用，代表在常規(guī)攝影一技術(shù)人員面臨的最常見的錯(cuò)誤。以下段落的具體地址錯(cuò)誤和顯微攝影并提出補(bǔ)救缺陷。
圖像離焦模糊或不清晰，一個(gè)缺乏應(yīng)有的關(guān)注和/或模糊的圖像的代表之一，顯微攝影中最常見的錯(cuò)誤。這些錯(cuò)誤的來源通常是在顯微鏡下站或焦距調(diào)整不當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)膜平面之間振動(dòng)的結(jié)果。經(jīng)常出現(xiàn)在焦點(diǎn)，通過目鏡將影像，但導(dǎo)致照片模糊或不清晰（圖2（a））。這是一個(gè)跡象表明，膜面和光學(xué)觀察可能不齊焦。在配備了調(diào)焦望遠(yuǎn)鏡，顯微鏡，檢查網(wǎng)線以確保它們是清晰的十字。仔細(xì)調(diào)整目鏡分劃板之間的焦點(diǎn)（如果有）和調(diào)焦望遠(yuǎn)鏡，兩刻線同時(shí)在重點(diǎn)。如果鏡頭揭示了一個(gè)重點(diǎn)是標(biāo)本，但在照相目鏡分劃板不集中，然后將標(biāo)本圖像會出現(xiàn)反銳化掩膜和反之亦然。用我們的交互式Java教程光掩模原版操作實(shí)踐這一技術(shù)。
齊焦的錯(cuò)誤經(jīng)常發(fā)生與低倍率（1倍）的物鏡在焦膜面深度很淺，輕微的顯微鏡聚焦旋鈕的結(jié)果在非銳化的圖像信息調(diào)整（見圖2（a））。在這兩個(gè)目鏡與調(diào)焦望遠(yuǎn)鏡刻線應(yīng)清晰，與目鏡的瞳距應(yīng)妥善保養(yǎng)。使用一個(gè)低倍率物鏡（10倍）仔細(xì)聚焦試樣通過目鏡使用微米或標(biāo)本與鋒利的邊緣清晰度。其次，在調(diào)焦望遠(yuǎn)鏡直到圖像清晰的調(diào)整分劃板，確保該網(wǎng)線薄十字也集中和明顯的疊加時(shí)，在空中圖像。許多制造商提供售后重點(diǎn)援助，這是一個(gè)簡單的可調(diào)放大鏡，可以用來查看調(diào)焦望遠(yuǎn)鏡分劃板輔助聚焦調(diào)節(jié)。調(diào)整目鏡就齊焦與對方和調(diào)焦望遠(yuǎn)鏡。同時(shí)檢查投影透鏡或光電管目鏡以確保其牢固就位。
當(dāng)使用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的單反相機(jī)后顯微攝影，圖像必須注重通過相機(jī)對焦取景器，這通常是一個(gè)毛玻璃屏。在低倍鏡下，屏幕上不存在一個(gè)問題，但如果地面玻璃表面過于粗糙，聚焦可以在更高的放大倍率變得困難。如果發(fā)生此問題，切換到聚焦屏具有清晰的圖像至關(guān)重要的焦點(diǎn)中心，或修改的大畫幅相機(jī)的聚焦屏的固井小蓋玻片到地面的玻璃屏幕表面（如建議約翰德利在他的書中”通過顯微攝影“用加拿大膠作為膠粘劑）。由此產(chǎn)生的結(jié)合提供了在屏幕的蓋玻片覆蓋的區(qū)域一個(gè)透明的中心。多莉也建議用軟鉛筆或墨水畫十字或印度的兩條對角線上的玻璃表面固井在蓋玻片之前。這個(gè)程序提供了一套“十字”視差聚焦。
圖2給出了一些照片，說明在顯微鏡聚焦誤差（圖2（a））和非銳化的圖像由于振動(dòng)（圖2（c））。標(biāo)本是椴樹一薄片（椴樹）干沾四混合專為植物組織。圖2（a）描述了一個(gè)典型的照片，是不是在重點(diǎn)由于光學(xué)和膠片平面之間的距離調(diào)整不當(dāng)引起的誤差，通過以上討論。在右側(cè)（圖2（c））是一個(gè)照片相同的視場，但受劇烈振動(dòng)，導(dǎo)致圖像的清晰度損失。圖2的顯微照片（b）說明了椴樹染色薄片的焦點(diǎn)。
顯微鏡是誰像散和必須戴眼鏡能生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)的銳利的圖像，即使試樣出現(xiàn)在通過目鏡的困難。它往往是很難通過調(diào)焦望遠(yuǎn)鏡而戴眼鏡的焦點(diǎn)調(diào)整試樣。該方法是使用一組高眼點(diǎn)鏡或聚焦望遠(yuǎn)鏡改正問題。與顯微鏡檢查制造商確定這些配件可供。
焦點(diǎn)也可以是一個(gè)問題時(shí)，試樣的制備是太厚或當(dāng)顯微鏡幻燈片是在不經(jīng)意間檢查顛倒（圖3（a））。厚度誤差常?？梢允褂瞄L工作距離物鏡克服，但最好的解決方法是重新使用較薄的切片標(biāo)本或擠壓蓋玻片更緊密的制備。一個(gè)倒置顯微鏡幻燈片的簡單的解決辦法是翻轉(zhuǎn)過來，所以玻璃蓋面臨的物鏡（圖3（a）和3（b））。偶爾，一些蓋玻片就會粘在一起和由此產(chǎn)生的顯微鏡玻片標(biāo)本制備過程中，將有兩個(gè)或兩個(gè)以上的蓋玻片，引起球面像差問題產(chǎn)生的顯微照片。如果懷疑這個(gè)錯(cuò)誤，仔細(xì)檢查包含干涉條紋的存在的顯微鏡載玻片蓋玻片，導(dǎo)致兩個(gè)蓋玻片之間的剩余空間將它。力最高的蓋玻片用鑷子。
校正鋌的高倍干物鏡或高干物鏡具有高數(shù)值孔徑與不匹配的蓋玻璃的使用不正確的調(diào)整（蓋玻片）往往是不清晰的照片的原因（圖3（c））。這些錯(cuò)誤是由于下或球面像差矯正當(dāng)顯微鏡蓋玻片要么太厚或太薄。在這種情況下，就不可能精確聚焦顯微鏡獲得清晰的圖像。在蓋玻片厚度問題的解決方案是一個(gè)正確的厚度取代一個(gè)不合適的蓋玻片（通常是1號?玻璃蓋，平均為0.17毫米厚的0.16和0.19毫米）之間的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差或使用物鏡配備一個(gè)校正環(huán)可以被調(diào)整以符合蓋玻片厚度。如果蓋玻片厚度不能調(diào)整（即，它是粘到試樣滑動(dòng)）或如果厚度是未知的和一個(gè)校正環(huán)的物鏡是不可用的，那么問題有時(shí)可以利用類似的放大倍數(shù)的油浸物鏡補(bǔ)救。由于浸泡油的折射率，蓋玻片厚度變化非常相似，變得不那么重要了。
顯微照片如圖3所示的球面像差誤差的影響。標(biāo)本染色切片馬鈴薯（馬鈴薯）與疫病菌感染的組織。圖3（a）顯示一個(gè)倒置的影響（倒）的顯微鏡載玻片，導(dǎo)致圖像中由于球面像差的對比度和清晰度。同樣地，圖3（c）闡述了校正衣領(lǐng)上的高數(shù)值孔徑和高放大倍率的物鏡不正確的調(diào)整。這個(gè)標(biāo)本的蓋玻片厚度為0.17毫米，但校正衣領(lǐng)被調(diào)整為一個(gè)0.23毫米厚。圖3（b）顯示的照片應(yīng)該出現(xiàn)在蓋玻片厚度進(jìn)行優(yōu)化和顯微鏡是適當(dāng)調(diào)整。
反銳化圖像的另一個(gè)原因是油（或者浸泡油或天然油來自指紋）對物鏡鏡頭前的照片上，目鏡透鏡（凸透鏡），或標(biāo)本的幻燈片。在干燥的物鏡前透鏡目前油是一種常見的事故可能發(fā)生時(shí)，其物鏡是放置在位置超過先前涂油滑。如果一個(gè)立體顯微鏡是可用的，刪除的物鏡和/或照相目鏡并仔細(xì)分析它在高放大倍率。石油污染經(jīng)?？梢钥吹角懊娴溺R頭使用這種技術(shù)。從顯微鏡鏡頭去除油可能是困難的，往往導(dǎo)致取代舊的灰塵在透鏡與新的灰塵和碎片。清潔鏡頭先輕輕去除多余的油從晶狀體組織表面，然后用一個(gè)木制敷貼藥棉或高質(zhì)量的鏡頭紙擦拭鏡頭清潔后與三氯乙烷，滋潤醚，或二甲苯。避免使用過多的溶劑，可用于固定透鏡攻擊其山水泥。
污染的除油后，用駝毛或黑貂刷除去灰塵，污垢，或碎片，可能對鏡頭的存在。刷可以脫脂浸入小體積的醚和搖動(dòng)它干。一個(gè)氣球或橡膠耳注射器經(jīng)常用來吹了松散的灰塵從鏡頭，但是不要用罐裝空氣，因?yàn)樗梢粤粝職埩粑锸歉y以去除比浸泡油。浸泡油污染最常發(fā)生在設(shè)計(jì)使用浸沒介質(zhì)物鏡，但干的物鏡也可以成為污染時(shí)，擺在一個(gè)蓋玻片有殘余油從觀察使用浸沒物鏡。經(jīng)常檢查干物鏡前透鏡污染時(shí)遇到錯(cuò)誤或不清晰的圖像的焦點(diǎn)與這些物鏡。
在許多古老的顯微鏡，物鏡是為了正確匹配到目鏡的光學(xué)像差在最終圖像。非銳化的圖像也可以通過顯微鏡主體管和物鏡之間的不匹配造成的機(jī)械尺寸管長度。最常用的固定長度的顯微鏡的物鏡是設(shè)計(jì)一個(gè)160毫米的管的長度，但這是不變的和使用具有不匹配的管長度的物鏡將導(dǎo)致球面像差的引入，降低圖像的清晰度。管長度的要求通常是刻在物鏡筒，以保證在使用前檢查該值的物鏡是用顯微鏡兼容。與無限光學(xué)校正的物鏡是用于配備管透鏡顯微鏡，和不使用舊標(biāo)準(zhǔn)的固定管長度的顯微鏡是合適的。同樣的，設(shè)計(jì)為一個(gè)固定的管的長度物鏡不能用無限遠(yuǎn)校正顯微鏡。
圖4說明了幾個(gè)錯(cuò)誤，通常采用浸泡油。標(biāo)本是一個(gè)多重染色薄片的苜蓿植物組織，已經(jīng)感染了冠癭病的真菌，physoderma alfalfae。左邊的照片（圖4（a））演示了通過高倍放大形成的圖像（60X）油浸物鏡時(shí)，氣泡被困的顯微鏡蓋玻片和物鏡的前透鏡之間。在這些條件下，所得到的圖像模糊和不清晰的，遭受巨大的損失，對比。如果目鏡是刪除，泡油可以在物鏡后焦面清晰可見。這個(gè)錯(cuò)誤通常發(fā)生在油物鏡，通常有一個(gè)稍凹的鏡頭前，降低至油池，一直放在蓋玻片表面。物鏡不應(yīng)放入浸泡油。相反，最好的做法是“搖擺”的物鏡為上方油與刷卡動(dòng)作通過旋轉(zhuǎn)接頭避免空氣滯留蓋玻片和物鏡的前透鏡之間。圖4（c）闡述了類似條件下采取的照片，但用干60X物鏡。由此產(chǎn)生的圖像是更好的焦點(diǎn)和具有比由圖4顯示了顯著更多的對比（一）。在這種情況下，圖像質(zhì)量的劣化是由于污染的油對物鏡鏡頭前。干物鏡相鄰放置在顯微鏡下物鏡轉(zhuǎn)盤的油浸物鏡容易被油污染時(shí)的物鏡是通過意外甩油池在顯微鏡蓋玻片。圖4中的圖像（b）是免費(fèi)的錯(cuò)誤和代表感染苜蓿組織應(yīng)出現(xiàn)。
間歇對焦錯(cuò)誤經(jīng)常發(fā)生由于振動(dòng)，通常被看到時(shí)，高倍率的物鏡是用于長時(shí)間曝光。用聚焦顯微鏡上使用可用的最高放大物鏡大幅振動(dòng)問題的試驗(yàn)樣品。連續(xù)振動(dòng)通常會導(dǎo)致試樣出現(xiàn)在運(yùn)動(dòng)。振動(dòng)與表或氣流從空氣處理機(jī)組和球迷會慢慢失去焦點(diǎn)顯微鏡。允許顯微鏡同時(shí)聚焦在樣品和測量振動(dòng)帶顯微鏡的聚焦所需的時(shí)間保持靜止。如果焦點(diǎn)落立即發(fā)生，某種形式的振動(dòng)隔離是必需的。然而，如果顯微鏡將在幾分鐘或更長的高倍率的焦點(diǎn)，然后振動(dòng)具有足夠低了大多數(shù)攝影一個(gè)微不足道的影響。
連續(xù)振動(dòng)誤差的影響可以用很快的快門速度來部分解決，通常在一個(gè)或幾個(gè)百分之一秒的順序。電子閃光單元還可以用來與更快的快門速度來克服在顯微攝影振動(dòng)誤差增加光照。然而，這種補(bǔ)救只是最小化振動(dòng)誤差的影響并不會消除的原因。在振動(dòng)問題的顯例，顯微鏡下應(yīng)安裝在振動(dòng)隔離的一組合適的減震器。一些顯微鏡制造商和一些售后供應(yīng)商提供的振動(dòng)“墊”（通常用氯丁橡膠，硅，或類似的聚合物），可以放在顯微鏡下足墊。
載物臺漂移是一個(gè)問題，當(dāng)載物臺的重量引起的運(yùn)動(dòng)在顯微鏡聚焦架，降低載物臺（標(biāo)本），使顯微鏡失去焦點(diǎn)。在許多現(xiàn)代顯微鏡，聚焦架張緊機(jī)構(gòu)包括消除或減少漂移。年長的顯微鏡，體驗(yàn)這個(gè)問題可能會有磨損或松動(dòng)的焦點(diǎn)架應(yīng)該由專業(yè)維修服務(wù)。
一些振動(dòng)問題是由照相機(jī)的機(jī)械快門的行為引起的附件。總是使用電纜釋放具有機(jī)械快門和增加曝光時(shí)間超過一秒的中性密度濾光鏡相機(jī)如果振動(dòng)問題依然存在。較長的曝光時(shí)間將減少閘門振動(dòng)的影響，只發(fā)生在暴露在最初的部分。
對比誤差，差圖像分辨率貧窮的對比度通常是一個(gè)跡象表明，臺下聚光鏡孔徑光闌打開太寬，導(dǎo)致耀斑和大大降低圖像的對比度。這個(gè)問題困擾著所有類型的攝影，包括顏色，黑色和白色，和數(shù)字。要糾正這個(gè)問題，去掉其中的目鏡和插入相位望遠(yuǎn)鏡進(jìn)入眼管或（如果顯微鏡裝有）擺動(dòng)的貝特朗透鏡的光路。同時(shí)觀察物鏡后焦平面，調(diào)節(jié)聚光鏡孔徑光闌直徑是65和百分之80，直到它的物鏡之間的縫隙（達(dá)到適當(dāng)?shù)?/trans>柯勒照明和最大限度地提高圖像的對比度）。使用反射光顯微鏡時(shí)，調(diào)整視場光闌孔徑光闌和改善對比度。
如上所述，利用蓋玻片，有一個(gè)不正確的厚度也可能導(dǎo)致的損失，對比高數(shù)值孔徑的物鏡（和圖像清晰度的缺乏）由于球面像差。檢查物鏡桶是否與蓋玻片厚度，或切換到一個(gè)蓋玻片厚度校正環(huán)的物鏡。反射光的物鏡是觀察和顯微攝影沒有校正蓋玻片的使用，以避免這種類型的物鏡上。
試樣本身可以對比問題的根源。透明的和未染色的標(biāo)本是很難使用明場照明圖像時(shí)使用的對比增強(qiáng)技術(shù)，如相對比，產(chǎn)生更好的照片，霍夫曼調(diào)制對比度，或微分干涉對比。斜光照也會提高未染色標(biāo)本的對比。
在黑白攝影技術(shù)對比過濾器時(shí)，可憐的過濾器的選擇往往會導(dǎo)致缺乏導(dǎo)致試樣的對比照片。正確使用對比的過濾器將當(dāng)用染色標(biāo)本確保更好的再現(xiàn)的標(biāo)本細(xì)節(jié)，但只有當(dāng)過濾器的顏色是互補(bǔ)的標(biāo)本。當(dāng)光的顏色相同的染色標(biāo)本是透過試樣，其結(jié)果是減少了試樣與背景的對比度。使用時(shí)，有最小的或僅部分吸收在該地區(qū)的試樣吸收可見光濾波器得到最佳的結(jié)果。對比也可以在黑色和白色的高反差膠片使用顯微攝影術(shù)的改進(jìn)（如柯達(dá)技術(shù)PAN）或通過化學(xué)開發(fā)商產(chǎn)生高對比度的使用。
在顯微攝影的幾種對比誤差在圖5，這說明了一系列的多彩色馬鈴薯明場圖像（馬鈴薯）組織薄片。左邊的照片（圖5（a））被fujichrome 64t，鎢平衡的透明薄膜，通常顯示的對比度顯著量當(dāng)妥善處理。在這種情況下，圖像是缺乏由于不當(dāng)?shù)奶幚砗?或聚光鏡孔徑光闌打開太寬的對比。圖5（c）說明了一個(gè)黑白照片拍攝的同一領(lǐng)域，但使用不同的過濾器和加工有高反差顯影液。圖5中的對比過量（C）是由于使用的增加在黑白攝影的對比色過濾器不正確的選擇。而不是使用一個(gè)過濾器，在可見光譜的綠色區(qū)域部分吸收（帶出紅色的vesicules對比），一個(gè)柯達(dá)Wratten 25號紅色濾光片進(jìn)行曝光和電影然后在產(chǎn)生的過多的對比條件下開發(fā)商錯(cuò)誤處理。中心的照片（圖5（b））說明了馬鈴薯薄片作為它應(yīng)該出現(xiàn)。
可憐的對比也可以發(fā)生在成像樣品太厚，上面詳細(xì)討論。這種情況可以通過仔細(xì)的樣品制備克服使用較薄的標(biāo)本，用蓋玻片固定到位并用透明膠固定，如加拿大香脂。
雖然少了彩色電影的問題，太多的對比，在黑白攝影經(jīng)常發(fā)生。主要的原因，如上面所討論的，是與染色標(biāo)本對比濾波器不正確的選擇，但薄膜的加工誤差也應(yīng)該懷疑。使用高對比度的電影如柯達(dá)技術(shù)便時(shí)，薄膜的開發(fā)者的選擇應(yīng)符合用于捕獲圖像的濾波相結(jié)合。如果對比濾波器設(shè)計(jì)減少試樣的對比選擇，那么開發(fā)者也應(yīng)該產(chǎn)生的低對比度圖像的黑白底片。相反，當(dāng)使用對比的過濾器來提高試樣的對比，選擇一個(gè)高對比度的軟件工程師，在最終圖像的對比度產(chǎn)生正確的金額。使用一個(gè)正常的膜的高對比度的開發(fā)商往往會導(dǎo)致過多的對比度的圖像，將延長開發(fā)時(shí)間。因?yàn)檫x擇電影的大范圍內(nèi)的黑白電影和發(fā)展代理商，應(yīng)該高度重視發(fā)展過程中以產(chǎn)生微調(diào)對比照片。
在顯微攝影分辨率差通常是對于臺下聚光鏡孔徑光闌調(diào)整不當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。當(dāng)一個(gè)顯微鏡是正確配置柯勒照明孔徑光闌，應(yīng)該有一個(gè)虹膜直徑開口位于65和百分之80之間的縫隙的物鏡。如果打開隔膜太遠(yuǎn)，會造成圖像的對比度差（圖6（a））和照片將遭受損失的知名度。如果光圈開縮小到直徑小于物鏡孔徑百分之50，分辨率明顯減少偽影的照片成為明顯的衍射。當(dāng)孔徑光闌孔減少到最小，嚴(yán)重惡化的發(fā)生和照片變得黑暗和模糊的衍射效應(yīng)，主要是暗暈周圍的精細(xì)結(jié)構(gòu)的細(xì)節(jié)邊緣。類似的情況發(fā)生時(shí)，臺下聚光鏡設(shè)置太低，在顯微鏡臺。這兩個(gè)錯(cuò)誤是在大小和聚光鏡產(chǎn)生的光照錐質(zhì)量下降的結(jié)果，不允許物鏡在其完整的數(shù)值孔徑的操作。
在顯微攝影常用的分辨率誤差，如圖6所示，它說明了一系列的梅花樹莖組織顯微染色薄片染黑的結(jié)，一個(gè)梅花病害的真菌引起的病梨孢（也被稱為口蘑為）。梅花樹組織切片選擇性著色透露細(xì)節(jié)和區(qū)分亞細(xì)胞成分之間的觀察。在這張圖中，凝汽器孔徑光闌開口設(shè)置在捕獲顯微圖像質(zhì)量的影響，利用fujichrome 64t透明膜與物鏡顯示（40x planachromat鈉= 0.75）和擺上鏡頭的消色差聚光鏡（鈉= 0.90）。近似聚光鏡開口尺寸：圖6（a）～百分之95（鈉= 0.81）；圖6（b）-百分之60（鈉= 0.54）；和，圖6（c）百分之20（鈉= 0.18）。
圖6（a），其中孔徑光闌設(shè)置一個(gè)位置中，聚光鏡和物鏡數(shù)值孔徑是相等的，多的很好的標(biāo)本細(xì)節(jié)是可見的，但仍有相當(dāng)數(shù)量的散射和眩光和整體形象的對比嚴(yán)重?fù)p害。形象也比其同行更明顯，這是與一個(gè)較小的光圈設(shè)置了。圖6（b）顯示在聚光鏡孔徑大小，產(chǎn)生一個(gè)數(shù)值孔徑約百分之70的物鏡梅干。減少眩光，形象十分鮮明，和精細(xì)的圖像細(xì)節(jié)是目前沒有明顯的衍射效應(yīng)。這個(gè)標(biāo)本，在圖6的顯微照片（b）代表聚光鏡孔徑光闌的優(yōu)化設(shè)置。當(dāng)膜片關(guān)閉到最小的設(shè)置對物鏡的數(shù)值孔徑百分之25（圖6（c）），精細(xì)的圖像細(xì)節(jié)變得模糊的衍射效應(yīng)。圖像還需要在一個(gè)黑暗的整體鑄造生產(chǎn)的試樣中的顏色變化。這個(gè)概念可以更詳細(xì)的使用交互式Java教程的分期探討聚光鏡孔徑光闌。
從上面的討論很明顯，聚光鏡孔徑光闌應(yīng)該設(shè)置一個(gè)位置，將提供一個(gè)折衷的混合物直接與偏轉(zhuǎn)光，取決于，在很大程度上，吸收，衍射，和試樣的折射特性。這一定是沒有壓倒文物，模糊的細(xì)節(jié)和對比增強(qiáng)圖像完成錯(cuò)誤。圖像細(xì)節(jié)和對比了必要的生產(chǎn)最好的照片也依賴于折射率，和其他標(biāo)本的相關(guān)的參數(shù)的光學(xué)特性。利用對比度增強(qiáng)技術(shù)時(shí)，顯微鏡的適當(dāng)調(diào)整和配置是保證這些特殊條件下試樣的準(zhǔn)確再現(xiàn)的重要細(xì)節(jié)。
當(dāng)孔徑光闌誤關(guān)得太遠(yuǎn)，偏離光開始模糊的直接照明光線，產(chǎn)生衍射的文物，造成明顯的條紋，條紋，在顯微照片和/或模式的形成。其他問題，如折射現(xiàn)象，也可以在一個(gè)圖像，不是真正的產(chǎn)生明顯的結(jié)構(gòu)。另外，打開聚光鏡孔徑過大引起不必要的眩光和光散射從樣品表面的光學(xué)顯微鏡。這導(dǎo)致了對比和洗出來的圖像細(xì)節(jié)的重大損失。正確的設(shè)置會有所不同，從試樣試樣，和經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員將很快學(xué)會準(zhǔn)確地調(diào)節(jié)聚光鏡孔徑光闌（和系統(tǒng)的數(shù)值孔徑）通過觀察圖像而無需在物鏡的后焦平面膜片。事實(shí)上，許多顯微鏡相信顯微鏡系統(tǒng)的數(shù)值孔徑的臨界壓優(yōu)化圖像質(zhì)量是攝影最重要的一步。
照明誤差建立適當(dāng)?shù)臈l件柯勒照明(K?hler)也許是關(guān)鍵的顯微照相顯微鏡配置最重要的方面。錯(cuò)誤發(fā)生最頻繁的照明光源時(shí)不正確的定位和/或物鏡和聚光器不與彼此或與顯微鏡光軸中心。輕微的這些組件的對準(zhǔn)誤差可能不顯著，而通過目鏡觀察試樣，但錯(cuò)誤會導(dǎo)致照片的強(qiáng)度梯度的產(chǎn)量。其結(jié)果將是一個(gè)照片顯示不均勻光照與試樣的圖像或背景比其他更黑暗的一面。
當(dāng)照片顯示照明錯(cuò)誤的證據(jù)，首先檢查燈絲對齊，燈箱反射器的位置，和擴(kuò)散的屏幕，位于光源與鏡座之間。一個(gè)失蹤的擴(kuò)散屏幕將導(dǎo)致燈絲被投影到樣本圖像共軛平面和可能導(dǎo)致的亮點(diǎn)，圖像的暗斑，和照度不均勻的顯微照片。如果擴(kuò)散屏幕正確定位，檢查燈絲對齊（記得之前檢查絲對準(zhǔn)的光學(xué)路徑去除擴(kuò)散屏幕）。目前許多顯微鏡特征預(yù)為中心的鹵素?zé)艉蛢?nèi)置的擴(kuò)散濾波器。這些儀器，燈泡的燈絲中已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了在裝配過程中，由制造商。圖7說明了顯微鏡的光端口的一個(gè)典型的看法時(shí)，纖維是通過放置一張白紙，可見毛玻璃，kimwipe，或在顯微鏡鏡頭清潔港口組織。圖7左側(cè)的端口（一）包含一個(gè)燈絲是嚴(yán)重的對齊和不正確放置一個(gè)圖像，將完全填充孔徑光闌也不是物鏡的后焦平面。使用平移調(diào)整燈的外殼，燈絲成為關(guān)注的焦點(diǎn)（圖7（b）），然后集中在光端口（圖7（c））。
適當(dāng)對準(zhǔn)絲困難可以如果聚光透鏡聚焦產(chǎn)生不正確。大多數(shù)內(nèi)置照明顯微鏡缺乏聚光透鏡的調(diào)整，這是預(yù)對準(zhǔn)和聚焦在工廠。在這種情況下，顯微鏡下必須由訓(xùn)練有素的技術(shù)人員提供服務(wù)。年長的顯微鏡可有聚光透鏡調(diào)整，或可配備外輻射源，有各種各樣的調(diào)整。在燈絲被正確對齊，在燈箱與鏡座之間的位置取代擴(kuò)散屏幕。請注意，在舊的顯微鏡配備鎢燈泡，燈泡內(nèi)的燈絲的位置可能會有所不同從一個(gè)到另一個(gè)燈。然后恢復(fù)顯微攝影，研究顯微鏡照明通過盡可能廣泛的領(lǐng)域通過查看通過目鏡沒有標(biāo)本中出現(xiàn)。這是通過選擇最低的倍率的物鏡可放置一個(gè)中性密度過濾器的光路中，減少光照強(qiáng)度完成。如果視野似乎仍然有不均勻的照明，然后對臺下聚光鏡對準(zhǔn)的嫌疑。
該聚光器通常配有一副定心螺釘，使技術(shù)人員到中心的凝汽器相對于物鏡和顯微鏡光軸。本程序建立K hler照明?是必要的，但聚光鏡可以成為錯(cuò)誤排列在日常使用的顯微鏡。檢查聚光鏡位置，第一旋轉(zhuǎn)10X物鏡為輕度染色標(biāo)本在顯微鏡載物臺上的地位。其次，通過提高或降低聚光器采用齒條機(jī)構(gòu)位于下方的載物臺重點(diǎn)視場光闌。膜片應(yīng)加在試樣的聚焦圖像和光圈關(guān)閉直到個(gè)別葉片出現(xiàn)清晰的虹膜開口直徑約25-40 %的視場填充。使用定心螺釘位于聚光鏡殼體中心視場光闌開在視場和刀片打開直到他們只是視野之外的。如果視場光闌葉片掩蓋了太多的視野，他們可以是一個(gè)不均勻的照明光源。
物鏡安裝在旋轉(zhuǎn)炮塔很少對準(zhǔn)誤差的來源是因?yàn)樗麄儽还潭ǖ紻é緩和位置。一些偏光顯微鏡有一個(gè)專門的物鏡轉(zhuǎn)盤允許物鏡集中在光通路由一對定心螺釘裝置。這些物鏡是特別有用，當(dāng)耦合到一個(gè)預(yù)中心的圓形載物臺，旋轉(zhuǎn)通過一個(gè)360度角（舊顯微鏡配備一個(gè)循環(huán)載物臺往往需要的個(gè)人物鏡為中心）。一個(gè)雙折射試樣可以放置在載物臺上，用來協(xié)助中心的物鏡在光學(xué)通路。避免與MIS物鏡一致的問題，經(jīng)常檢查以確保接頭牢固地定位在Dé緩和指數(shù)停止范圍。旋轉(zhuǎn)時(shí)，管口應(yīng)“點(diǎn)擊”的光學(xué)路徑中的同一位置的每一個(gè)物鏡。
漸暗的圖像外邊緣（俗稱漸暈）在照片通常是由不正確的對準(zhǔn)聚光器引起，或聚光鏡設(shè)置不適當(dāng)?shù)母叨仍陲@微鏡臺。當(dāng)電容器配置不正確，在縮小孔徑光闌開口尺寸，可以導(dǎo)致變黑的在領(lǐng)域的邊緣，或漸暈在顯微照片（圖8（c））。漸暈的另一個(gè)原因是使用具有放大系數(shù)與乳液膜的大小和無法滿足全膜對角不兼容的照相機(jī)目鏡，或有一個(gè)或大或小的長度比在膜平面圖像工程是必要的目光管。作為一個(gè)例子，一個(gè)4×5寸照片對角線為145毫米。當(dāng)使用一個(gè)0.63x倍率投影透鏡（數(shù)字CCD相機(jī)常用的），有一個(gè)21毫米的場大小的10倍的目鏡將產(chǎn)生一個(gè)圖像直徑132毫米，產(chǎn)生漸暈在圖像的角落。更改為1x或（更常見）2.5倍投影鏡頭產(chǎn)生210和525毫米字段大小，分別。高倍率的投影鏡頭會產(chǎn)生是免費(fèi)的暈影圖像。
顯微照片如圖8所示的特征一個(gè)染色薄片胎豬的牙。圖8（a）顯示牙齒薄片當(dāng)燈絲不正確的中心。在這種情況下，有一個(gè)逐漸暗淡的圖像從右到左的照片。漸暈的圖像，如圖8所示（C），這表現(xiàn)在逐漸暗淡的邊緣處的圖像區(qū)域，包括一個(gè)圓形圖案包圍圖像由于不正確的聚光器高度。當(dāng)相機(jī)的快門速度太快讓電影的反應(yīng)也會發(fā)生此錯(cuò)誤（快門速度比快0.01秒）。圖8的顯微照片（b）顯示的圖像應(yīng)該出現(xiàn)在顯微鏡照明配置得當(dāng)。
當(dāng)一個(gè)顯微照片揭示黑暗的角落，清晰的光圈快門葉片圖像，然后現(xiàn)場隔膜可能不充分打開，應(yīng)在目鏡是可見的。的視場光闌虹膜開口大小適當(dāng)?shù)恼{(diào)整只是視野之外的至少包括場區(qū)外的照片。結(jié)果在類似的顯微照片的另一個(gè)錯(cuò)誤（暗角）經(jīng)常發(fā)生時(shí)，相機(jī)的快門位于太遠(yuǎn)高于視點(diǎn)。在快速的快門速度，相機(jī)的快門葉片的圖像可以被記錄在照片的輪廓圖像，錯(cuò)誤被稱為快門陰影。雖然現(xiàn)代顯微鏡，經(jīng)常有匹配的相機(jī)系統(tǒng)較少，快門陰影可以是一個(gè)問題時(shí)，將有一個(gè)完整的透鏡系統(tǒng)的照相機(jī)。在后者的情況下，鏡頭將決定視點(diǎn)位置。為了緩解這個(gè)問題，把中性密度過濾器的光路中，增加的曝光時(shí)間，從而允許較慢的快門速度。
黑斑和碎片污垢，黑斑，和碎片的顯微照片是問題的方法常見的來源，并可能發(fā)生在與圖像或作為一個(gè)模糊的點(diǎn)上的薄膜的焦點(diǎn)。這種類型的污染可以表現(xiàn)為有色神器使用彩色膠片的時(shí)候，又是黑白電影的黑色或灰色的斑點(diǎn)。如果碎片出現(xiàn)在了大家關(guān)注的焦點(diǎn)，這通常是發(fā)生在透鏡表面，居住在一個(gè)平面共軛聚焦試樣污染。物鏡和任何玻璃（通常顏色平衡或校正濾波器）相鄰的顯微鏡視場光闌往往容易收集灰塵，這些組件躺在附近的一個(gè)主要的圖像共軛面。污染的近場的隔膜將出現(xiàn)在電影焦點(diǎn)，和劃痕或灰塵過濾器放置在視場光闌往往是一個(gè)源的煙霧和碎片的文物。玻璃表面被劃傷會出現(xiàn)在照片不清晰的地方，將氣泡嵌在光源聚光玻璃或在吸熱器。通常這些氣泡會有一個(gè)藍(lán)色的色調(diào)時(shí)，記錄在膠片上。屏幕的玻璃內(nèi)的灰塵和碎片或缺陷擴(kuò)散屏幕表面污染（泡沫）的粉紅色或藍(lán)色斑點(diǎn)的顯微照片的結(jié)果。
污垢和碎屑的另一個(gè)常見的來源是試樣本身，也居住在一個(gè)共軛平面。粘塵的蓋玻片表面會出現(xiàn)無黑點(diǎn)在膜污染，而在蓋玻片附近或混合試樣通常會出現(xiàn)碎片是在與試樣的焦點(diǎn)。在中間圖像平面透鏡的灰塵和碎片是不常見的，但有時(shí)也會發(fā)生。這架飛機(jī)是位于目鏡固定膜，它可以成為污染當(dāng)目鏡是從顯微鏡鏡頭最近的固定膜片變臟。
當(dāng)查看污染通過顯微鏡目鏡，試圖找到源頭，慢慢把每個(gè)目鏡單獨(dú)確定碎片點(diǎn)旋轉(zhuǎn)的一個(gè)目鏡。如果是這樣的話，那么污染位于目鏡本身。旋轉(zhuǎn)鏡的光學(xué)路徑中的其他組件，如濾波器，投影鏡頭，攝像系統(tǒng)，和聚光鏡時(shí)，試圖找到灰塵和碎片來源。在某些情況下，它有助于捕捉構(gòu)造一個(gè)記錄是被轉(zhuǎn)動(dòng)的物鏡顯微照片。將試樣而來回通過目鏡觀察以確定碎片的動(dòng)作與試樣。最后，擺動(dòng)的物鏡和聚光鏡頂部透鏡的流入和流出的光路，檢查是否與物鏡或聚光鏡碎片移污染。
偶爾，纖維和纖維之間的楔形葉片可能成為在該領(lǐng)域的膜片或夾在膜載體內(nèi)的相機(jī)或黑盒。當(dāng)這種情況發(fā)生時(shí)，碎片會出現(xiàn)清晰的（見圖9（c））。這種類型的污染是更難以診斷，可能存在一些問題與去除。如果在視場光闌有雜物，一個(gè)經(jīng)驗(yàn)豐富的維修工程師應(yīng)采用顯微鏡清洗。在相機(jī)的碎片后可以用壓縮空氣清除或駝毛刷。從鏡頭，過濾器清潔污垢和碎片，和試樣滑動(dòng)應(yīng)仔細(xì)做鏡頭紙或軟棉拭子。使用可壓縮空氣在距離或輕輕掃用駝毛刷舉行刪除任何松散的泥土。
圖9給出了幾種顯微照片顯示的灰塵和碎片除了場曲率誤差污染誤差。標(biāo)本是一個(gè)多重染色薄片蘋果樹感染雪松蘋果銹干，影響了美國北部的落基山脈以東的蘋果樹的一種病。它是由真菌引起的蘋果杜松virginianae可落葉喬木和殘疾的果實(shí)讓他們賣不出去。的顯微照片示于圖9（c）顯示的灰塵，碎片重污染的影響，并對黑斑圖像。產(chǎn)生的一些原因，這些文物，和碎片可以在不同的區(qū)域上的顯微鏡和/或標(biāo)本按上面的討論。圖像的焦點(diǎn)問題產(chǎn)生的場曲像差瘟疫的照片如圖9（a），它具有鮮明的定義在邊緣，但在中心失去焦點(diǎn)。這些錯(cuò)誤的問題將在以后討論。
亮點(diǎn)和鏡面反射來自于從高架照明或輔助照明從外部光源的鏡面反射，可以對照片的亮點(diǎn)。這些錯(cuò)誤是特別流行時(shí)，很長時(shí)間暴露在熒光顯微照相。為了解決這個(gè)問題，可以關(guān)閉頂燈（或輔助照明）或覆蓋地區(qū)的直接影響。上了年紀(jì)的顯微鏡類似的問題發(fā)生在當(dāng)一個(gè)分束器是用來查看雙目頭和管之間的。繞過這個(gè)問題通過調(diào)節(jié)分束器的位置的所有顯微鏡照明被引導(dǎo)到光電管。反思也成為一個(gè)問題，當(dāng)標(biāo)本成像而沐浴在溶液中或通過一個(gè)非常厚的玻璃蓋和/或標(biāo)本夾（超過1毫米）使用長工作距離物鏡。有沒有簡單的治療當(dāng)成像通過厚厚的玻璃，但從水溶劑的表面反射可以采用水浸的物鏡了。
在照片的亮點(diǎn)可以發(fā)生在傳統(tǒng)的單反相機(jī)采用了積分鏡頭捕捉的圖像。類似的位置也與目鏡照相機(jī)鏡頭，減少了在顯微鏡的投影透鏡共同。攝影機(jī)鏡頭的前表面應(yīng)定位為接近投影透鏡的出射點(diǎn)盡可能避免亮點(diǎn)。如果太接近，物鏡的后透鏡的圖像可以被記錄為一個(gè)焦點(diǎn)上的電影。現(xiàn)場將出現(xiàn)明亮的透明膜，或在彩色或黑白底片暗斑。常能緩解這個(gè)問題可以通過重新定位相機(jī)相對于照相機(jī)目鏡或投影透鏡。為了避免暈，小心不要太遠(yuǎn)的投影透鏡移動(dòng)攝像機(jī)。
場曲率誤差當(dāng)顯微鏡的邊緣清晰，但中心已經(jīng)失去了它的焦點(diǎn)（圖9（a），這個(gè)問題可能是場曲率在物鏡像差。檢查以確保它是標(biāo)志物鏡桶平場指示物鏡，一直是平坦的場光學(xué)矯正。未矯正的物鏡不會產(chǎn)生整個(gè)顯微鏡視場清晰的影像。這個(gè)錯(cuò)誤也會發(fā)生在反射光試樣時(shí)，試樣略傾斜或一個(gè)安裝角。要糾正這個(gè)問題，重新安裝的標(biāo)本或使用橡皮泥和壓縮機(jī)提供一個(gè)可調(diào)的水平的基。大多數(shù)物鏡顯示有限數(shù)量的場曲像差由于在軸和離軸成像光束路徑的距離的變化。在這種情況下，利用細(xì)聚焦旋鈕漂移通過從邊緣向中心集中，以確定場曲像差。更換物鏡與平場物鏡未解決色差問題。如果物鏡更換幾乎是不可能的，限制記錄在照片的中心區(qū)域的領(lǐng)域盡可能，或安裝一個(gè)高倍率的投影鏡頭減少字段大小。
帶霧當(dāng)照片顯示帶狀區(qū)域，霧或淘汰，那么問題可能是通過打開相機(jī)非常簡要的光線引起的。這種情況也會發(fā)生在相機(jī)背面有沿鉸鏈漏光或抓住。霧度將取決于時(shí)間的后面是開放的長度和房間的光亮度。為了緩解這一問題，使某些電影是完全重繞打開相機(jī)之前回來。如果懷疑有漏光，有專業(yè)的維修人員檢查相機(jī)回來。
