尼康顯微鏡的熒光激發(fā)塊

平場(chǎng)免疫熒光顯微術(shù)指的是旨在觀察上述熒光團(tuán)的顯微鏡。光學(xué)系統(tǒng)包含一個(gè)光源為勵(lì)磁 （通常汞燈） 和一個(gè)激發(fā)塊來(lái)分開(kāi)熒光激發(fā)光。有許多激發(fā)塊供不同種類的熒光團(tuán)，可能會(huì)切換為連續(xù)查看標(biāo)本沾有多種類型的熒光團(tuán)的任何時(shí)間。

如圖 1 所示，2 種類型的激發(fā)快和 1 二色鏡的構(gòu)建激發(fā)塊。選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)塊和每次使用鏡子使得研究人員能夠達(dá)到一個(gè)高的信號(hào)信噪比 （S/N） 比之間的熒光和背景光。下文介紹了這些光學(xué)元件的功能。

勵(lì)磁激發(fā)塊是將只有激發(fā)光所需的波長(zhǎng)從激發(fā)光源 （通常汞燈） 傳遞到熒光基團(tuán)的光元素。如圖 2 所示，只有激發(fā)波長(zhǎng)通過(guò)激發(fā)塊，通常"帶通激發(fā)塊"。

二色鏡是分開(kāi)的熒光激發(fā)光光學(xué)元件。二色鏡是光的特殊的鏡子，反映只有一個(gè)特定波長(zhǎng)，允許所有其他波長(zhǎng)的光線通過(guò) （圖 3）。在平場(chǎng)免疫熒光顯微鏡激發(fā)塊中使用的分色鏡放置在 45 ° 入射角，輕，創(chuàng)建一個(gè)"停止帶"的"及格樂(lè)隊(duì)"的傳輸?shù)墓夂头瓷涞墓狻?/span>光通過(guò)勵(lì)磁激發(fā)塊被反映 90 ° 朝著這一目標(biāo)和標(biāo)本。*后，從試樣所產(chǎn)生的光是通過(guò)傳遞和朝向觀察者 （或高靈敏度相機(jī)）。

障礙激發(fā)塊分離產(chǎn)生的從其他背景光熒光的熒光的光學(xué)元件。如圖 4 所示，屏障激發(fā)塊傳輸阻塞所有其他輕微泄漏從 （反映從標(biāo)本或光學(xué)元件） 的激勵(lì)燈同時(shí)穿過(guò)二色鏡熒光波長(zhǎng)的光。這是必要的因?yàn)闊晒夤獾膹?qiáng)度是比*過(guò) 100，光靠一個(gè)因素的激勵(lì)弱 000:1。大多數(shù)障礙激發(fā)塊被放置在一個(gè)小的角度，以允許更好的熒光成像通過(guò)抑制鬼魂形象。

尼康的平場(chǎng)免疫熒光顯微鏡都有一種專有的稱為"噪音終結(jié)者"的尼康光學(xué)元件 （模型 TE2000 及更高版本）。如圖 1 所示，噪音終結(jié)者允許高效加工的光通過(guò)二色鏡傳輸通過(guò)防止光線從激發(fā)塊內(nèi)散射和漏入的觀測(cè)圖像激發(fā)。這有助于消除背景光噪聲和更有效的熒光圖像。

所選色鏡必須有效分離激發(fā)光和熒光光的波長(zhǎng)。具體而言，其透光率截止位于 fluophore 的激發(fā)波長(zhǎng)和其熒光波長(zhǎng)之間二色鏡必須通過(guò)比較鏡子的特性曲線與熒光的波長(zhǎng)，鏡子放在 45 ° 入射角時(shí)發(fā)現(xiàn)。
如果 fluophore 的激發(fā)波長(zhǎng)和其熒光波長(zhǎng)關(guān)系密切，斯托克城的轉(zhuǎn)變 （注 1） 是小，然后應(yīng)選擇鏡像與更小的截止波長(zhǎng)，讓盡可能多的熒光信號(hào)，通過(guò)盡可能。

選擇一個(gè)激發(fā)塊，允許激發(fā)波長(zhǎng)下，順利通過(guò)。尤其是當(dāng)汞燈用作光源，有效的激勵(lì)被通過(guò)線譜的汞燈納入波長(zhǎng)。允許之外的目標(biāo)熒光傳遞激發(fā)波長(zhǎng)的波長(zhǎng)將既增加背景光和損害標(biāo)本。如圖 7 所示，激勵(lì)效率較低的波長(zhǎng)為 440 牛米。