奧林巴斯顯微鏡，反射光熒光顯微鏡結(jié)構(gòu)

 在反射光熒光顯微鏡的柯勒照明，光源的圖像通過孔徑虹膜膈位于垂直照明器的集熱器鏡頭聚焦。這光圈與后方孔徑的物鏡和燈電弧或絲，共享一個(gè)共軛平面，因此，確定照明的領(lǐng)域孔徑大小。在一起，焦平面 （瞳孔） 形成的照明集光源、 垂直照明器孔徑光闌和物鏡后方的共軛的飛機(jī)。打開或關(guān)閉孔徑光闌用于控制雜散光和調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度 （數(shù)值孔徑） 而不改變照明字段的大小。在圖像中，孔徑光闌的調(diào)整會(huì)影響亮度和對(duì)比度。本互動(dòng)教程將探討在反射光 （顯示） 中的光通路熒光顯微鏡。

本教程使用初始化切掉出現(xiàn)在窗口中反射的光熒光顯微鏡的示意圖。單擊外部按鈕將恢復(fù)到外部視圖顯微鏡的圖像 （和更改按鈕來讀取里面）。為了運(yùn)行本教程中，使用字段隔膜和孔徑光闌滑塊來調(diào)整字段大小和數(shù)值孔徑，分別，顯微鏡照明。光照強(qiáng)度滑塊各不相同的輸出從虛擬燈箱任意值的 25%和 100%之間。可以使用篩選器多維數(shù)據(jù)集滑塊更改安置在垂直照明器炮塔的熒光篩選器塊。在本教程中可用的激發(fā)波長是 350、 450、 550、 600、 650 毫微米。作為篩選器塊旋轉(zhuǎn)入光路，照明的顏色將發(fā)生更改以匹配勵(lì)磁和熒光發(fā)射波長的單個(gè)篩選器集。

圖像形成或字段設(shè)置在反射光柯勒照明包括字段隔膜、 試樣表面和中間圖像平面的共軛平面。因此，當(dāng)字段隔膜放置在試樣平面的焦點(diǎn)時(shí)，光源的圖像顯著從中刪除焦點(diǎn)提供一個(gè)均勻的照明領(lǐng)域。場橫膈膜控制照明字段的大小而不影響光照強(qiáng)度的被觀察的區(qū)域。在實(shí)踐中，字段隔膜開口尺寸應(yīng)盡可能增加圖像的對(duì)比度，減少地區(qū)不被直接觀察到的光漂白的程度小。柯勒照明產(chǎn)生均勻的照明，盡管大多數(shù)弧光放電和基于燈絲的光源產(chǎn)生的不均勻光照強(qiáng)度的試樣字段。顯微鏡正確配置時(shí)，后方的焦平面的物鏡是充分的照明，提供從邊緣到邊緣均勻明亮的字段。柯勒照明，在理想情況下，沐浴著一整套收斂的波前，每日所產(chǎn)生的單獨(dú)點(diǎn)光源進(jìn)入聚光鏡孔徑成像的樣品。在正確配置的熒光顯微鏡下，結(jié)果是*佳的圖像對(duì)比度和分辨率。

反射光熒光顯微鏡以壓倒多數(shù)是選擇的當(dāng)前方法為視場與非相干光源，以及那些與激光掃描共焦和多光子儀器進(jìn)行的調(diào)查。熒光顯微鏡觀察這個(gè)流行的模式也被稱為是入射光的熒光，熒光顯示或只是計(jì)劃免疫熒光。一個(gè)典型的現(xiàn)代反映光熒光顯微鏡，還裝備了用于透射光觀察在各種對(duì)比增強(qiáng)模式，提出了在圖 1 中。顯微鏡包含三目觀察頭耦合到電荷耦合器件 （CCD） 的攝像系統(tǒng)，并具有兩個(gè)照明光源，一個(gè)用于透射光，另一個(gè)用于顯示觀測 （鹵鎢和汞弧光放電，分別）。這種設(shè)計(jì)的顯微鏡可以組合或備用有熒光反射光透射光相位對(duì)比法、 微分干涉對(duì)比 （DIC），偏振的光或霍夫曼調(diào)制的對(duì)比觀察。

任何熒光顯微鏡的基本特征是有選擇性地過濾照明遵循由孤立的多弱熒光發(fā)射，使用第二個(gè)篩選器，使一個(gè)黑暗的背景圖像的形成與*高的靈敏度與提供試樣的激勵(lì)機(jī)制。生物標(biāo)本中的本地化的探針濃度偏低在許多實(shí)驗(yàn)中只有一小部分的激發(fā)光吸收的熒光的物種。此外，這些熒光團(tuán)，能夠吸收大量，會(huì)產(chǎn)生二次熒光的百分比是光照的甚至更低。由此產(chǎn)生的熒光發(fā)射亮度級(jí)別將三至六個(gè)數(shù)量級(jí)小于照度之間的范圍。因此，在熒光顯微鏡中的根本問題是標(biāo)本的產(chǎn)生高效率照明，同時(shí)捕獲有效地分開，更激烈的照明樂隊(duì)的弱熒光發(fā)射時(shí)。這些條件得到滿足現(xiàn)代熒光文書中的協(xié)調(diào)行動(dòng)和進(jìn)行兩色的非局域性質(zhì)的基礎(chǔ)的激勵(lì)和排放要求的篩選器組合。