尼康顯微鏡相差怎么對(duì)準(zhǔn)
相襯顯微鏡的仔細(xì)比對(duì)是必要的，以便產(chǎn)生*大的反差效果，而不會(huì)引入降解標(biāo)本外觀或?qū)е洛e(cuò)誤的解讀文物。 這種互動(dòng)式教學(xué)探討變化的時(shí)候，聚光鏡環(huán)被移入和移出對(duì)準(zhǔn)相位板的物鏡是通過(guò)目鏡（在不同的放大倍數(shù)）怎么標(biāo)本出現(xiàn)。
本教程初始化與標(biāo)本出現(xiàn)在顯微圖像窗口上的教程的右側(cè)隨機(jī)選擇的相襯。 鄰近該窗口是物鏡后側(cè)焦點(diǎn)面的圖（題為物鏡后側(cè)焦平面 ;在左側(cè)）示出了物鏡相位板和聚光鏡的環(huán)形帶的附近。 默認(rèn)情況下，物鏡相位板和聚光鏡環(huán)光錐是不對(duì)齊的，必須使用X-翻譯和y平移滑塊被重新定位。 將這些滑動(dòng)件使操作者能夠調(diào)節(jié)聚光鏡環(huán)形光錐的位置相對(duì)于所述固定物鏡相板。當(dāng)兩個(gè)環(huán)體被集中時(shí)，獲得*大可能的標(biāo)本對(duì)比度。
作為替代平移滑塊，鼠標(biāo)光標(biāo)可用于在窗口內(nèi)拖動(dòng)聚光鏡環(huán)形圖像，以便它可以在物鏡相位板的周邊之內(nèi)的任何位置。 新的標(biāo)本可以被加載到本教程通過(guò)使用選擇A試片下拉菜單，物鏡放大倍數(shù)可以通過(guò)選擇物鏡菜單中更改。 一個(gè)新的標(biāo)本或物鏡選擇每一次，教程會(huì)自動(dòng)重新加載的隨機(jī)偏差聚光鏡環(huán)和物鏡相環(huán)。
而使用伯特蘭透鏡或相位望遠(yuǎn)鏡觀看的物鏡的固定相環(huán)時(shí)，操作者可以再執(zhí)行調(diào)整到聚光鏡環(huán)形位置來(lái)對(duì)齊兩個(gè)用于相襯觀察（參見(jiàn)圖1）。 示于圖1是物鏡的后側(cè)焦點(diǎn)面上的未對(duì)準(zhǔn)的圖像（圖1（a）和圖1（c））和后聚光鏡纖維環(huán)和相位環(huán)已被正確地對(duì)準(zhǔn)（圖1（e））。 也示于該圖中是通過(guò)目鏡（圖1（b），1（d）和1（F）），這表明，當(dāng)在顯微鏡未對(duì)準(zhǔn)試樣的顯示方式（圖1（觀看時(shí)，出現(xiàn)在相應(yīng)的圖像b）和圖1（d）），并仔細(xì)對(duì)齊（圖1（F））按照下面列出的步驟。
在試圖使一個(gè)顯微鏡相襯觀察，檢查儀器仔細(xì)，以確保所有物鏡包含相位板，并牢固地安裝在物鏡轉(zhuǎn)換器。 物鏡還應(yīng)該順序地排列在其上排列的物鏡轉(zhuǎn)換器，從低到高的放大倍率，以便*大限度地減少1聚光鏡的環(huán)形帶和另一個(gè)之間切換的頻率。 通常情況下，10倍和20倍的物鏡，有著共同的聚光鏡環(huán)，因?yàn)檫@樣做的40倍和60倍的物鏡。 高度校正物鏡，如專為油浸apochromats，往往有相似的數(shù)值孔徑，并使用相同的聚光鏡環(huán)在更寬的范圍內(nèi)放大倍率（40倍到100倍）。 低倍率相位對(duì)比（4倍和5倍），通常需要一個(gè)擺動(dòng)鏡頭聚光鏡和聚光鏡專用環(huán)。
聚光鏡環(huán)形板也應(yīng)順序排列，從設(shè)計(jì)用于低倍率物鏡的環(huán)形空間，并繼續(xù)直至1設(shè)計(jì)的*高放大倍數(shù)。 在一般情況下，在整個(gè)放大率范圍可覆蓋三個(gè)或四個(gè)獨(dú)立的環(huán)。 如果一個(gè)普遍的聚光鏡采用，定位*低的放大倍率環(huán)（例如，PHL或PH1）到明槽的右邊，而其他板塊在周邊槽順序。 通常，試樣必須檢查在之前或之后相襯觀察明場(chǎng)，所以這種布置將提供一個(gè)容易的工作流程。
被推薦為相襯顯微鏡的對(duì)準(zhǔn)下面的步驟。
放置一個(gè)明亮的染色標(biāo)本在載物臺(tái)上旋轉(zhuǎn)10X相襯物鏡成明照明模式下的光學(xué)通路。聚焦樣本，并關(guān)閉該視場(chǎng)光闌，直到它進(jìn)入視場(chǎng)的邊緣。 用聚光鏡高度調(diào)節(jié)旋鈕，定位臺(tái)下聚光所以各樹(shù)葉的視場(chǎng)光闌的是在清晰聚焦，并利用主聚光鏡定心調(diào)整旋鈕，以確保視場(chǎng)光闌的中心在視場(chǎng)中。 請(qǐng)仔細(xì)檢查顯微鏡配置，以確?？评照彰饕呀?jīng)實(shí)現(xiàn)，并且標(biāo)本是在大家關(guān)注的焦點(diǎn)。
取出染色標(biāo)本，并放置一個(gè)階段標(biāo)本在顯微鏡載物臺(tái)上。 在情況下，物鏡試樣僅具有*小的光程差（和可能難以顯現(xiàn)），配合已知能產(chǎn)生高對(duì)比度的相襯模式標(biāo)本的顯微鏡。 轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器轉(zhuǎn)盤直到適當(dāng)?shù)沫h(huán)形定位在光路徑（ 的Ph1或等效為10x物鏡）。 檢查以確保聚光鏡環(huán)顏色代碼或題詞相匹配的物鏡。 檢查聚光鏡孔徑光闌調(diào)節(jié)桿的位置，并將其移動(dòng)到*寬光圈位置（專為相襯聚光鏡可自動(dòng)執(zhí)行此操作）。
如果顯微鏡配備一個(gè)伯特蘭透鏡，使用指輪控制的透鏡擺動(dòng)到位。 另外，取出顯微鏡目鏡中的一個(gè)，并插入一個(gè)階段望遠(yuǎn)鏡進(jìn)入觀察筒。
同時(shí)通過(guò)目鏡或相位望遠(yuǎn)鏡窺視，調(diào)整勃氏鏡或望遠(yuǎn)鏡聚焦眼球管的焦點(diǎn)，直到在物鏡相板是大家關(guān)注的焦點(diǎn)，和聚光鏡環(huán)和黑暗的中性密度材料的明亮的圖像之間的重疊相位板是顯而易見(jiàn)的。 在許多情況下，在顯微鏡*初將不對(duì)準(zhǔn)和纖維環(huán)的圖像將不能準(zhǔn)確地疊加在中性密度材料中的相位板（如圖1（a）和圖1（c））。
定位在聚光鏡環(huán)形定心銷（或螺釘）與調(diào)節(jié)環(huán)的位置用一對(duì)螺絲起子或適當(dāng)?shù)男o，直到它是一致的物鏡標(biāo)相位板（圖1（e））。 注意：不要試圖調(diào)整聚光鏡環(huán)的位置與主聚光鏡定心旋鈕（通常位于連接到顯微鏡聚光鏡安裝支架）。 這方面的努力可能不會(huì)達(dá)到預(yù)期的聚光鏡環(huán)對(duì)準(zhǔn)肯定會(huì)危及先前應(yīng)該已經(jīng)建立了科勒照明條件。
當(dāng)聚光鏡纖維環(huán)在正確的位置時(shí)，光通過(guò)該環(huán)通過(guò)聚光鏡將被施加到物鏡相位板，降低了環(huán)形圖像的強(qiáng)度的中性密度材料被衰減。 因此，如果聚光器環(huán)形不當(dāng)居中，明亮的月牙邊會(huì)出現(xiàn)相鄰的物鏡相位板的中性密度材料（圖1（a）和圖1（c））。如果環(huán)的形象不相板的黑圓內(nèi)放不下，那么無(wú)論是聚光鏡失焦（和科勒照明是不成立的），或相望遠(yuǎn)鏡（或伯特蘭鏡頭）不集中的物鏡后側(cè)焦點(diǎn)面。 在某些情況下，甚至當(dāng)相望遠(yuǎn)鏡（或伯特蘭鏡頭）和臺(tái)下聚光正確聚焦，聚光環(huán)圖像模糊，并出現(xiàn)失焦。 這可以通過(guò)從檢體低頻衍射引起的。 如果發(fā)生這種情況，從載物臺(tái)上移除標(biāo)本，并進(jìn)行顯微鏡對(duì)準(zhǔn)。
如果聚光鏡環(huán)形圖像是顯著不同的尺寸從該物鏡相位板，檢查是否錯(cuò)環(huán)形板已被安裝在所述聚光鏡（*可能的原因）。 另一種可能性，如果高數(shù)值孔徑的油浸物鏡被采用，是在聚光鏡前透鏡元件被設(shè)計(jì)為浸入。 在這種情況下，它可能是困難的（或不可能）疊加在相位板聚光鏡環(huán)形無(wú)油的聚光透鏡和所述顯微鏡載玻片（和/或所述物鏡和蓋玻片之間）之間的壓降。
當(dāng)聚光鏡環(huán)和物鏡相板在適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，在圖1（e）所示的圖像應(yīng)該出現(xiàn)在階段望遠(yuǎn)鏡目鏡或用勃氏鏡到位。 在這一點(diǎn)上，在顯微鏡的配置是否正確觀察相襯照明試樣。
用目鏡代替階段望遠(yuǎn)鏡，或旋轉(zhuǎn)伯特蘭透鏡出光路徑，并檢查標(biāo)本。 背景應(yīng)該出現(xiàn)在色的中性灰色（取決于物鏡相位板的中性密度）與在高對(duì)比度可見(jiàn)的試樣。
一旦顯微鏡已經(jīng)對(duì)準(zhǔn)相位相反，它通常會(huì)保持其中心定位為相當(dāng)數(shù)量的物鏡/年輪的變化，但應(yīng)定期檢查，以確保正確對(duì)齊。 如果在顯微鏡開(kāi)始偏離了對(duì)齊，出現(xiàn)在目鏡（或在計(jì)算機(jī)顯示器上）的圖像將出現(xiàn)越來(lái)越多像那些明照明觀察。