尼康顯微鏡光譜成像與FRET生物傳感器

 除了 在去除不需要的自發(fā)熒光，可以在許多標(biāo)本掩蓋細(xì)節(jié)的效用，光譜成像也是分離的動態(tài)熒光共振能量轉(zhuǎn)移熒光蛋白和其他熒光團(tuán)的重疊發(fā)射光譜的顯著優(yōu)點(diǎn)（FRET）的實(shí)驗(yàn)中，這往往是復(fù)雜通過為極其快速的圖像捕捉的要求。 這種互動式教學(xué)探討修改包含融合青色，而在接受時(shí)除了鈣共振能量轉(zhuǎn)移的變化黃色熒光蛋白焦躁生物傳感器的光譜分布。

本教程初始化與鈣的生物傳感器（YC3.6）被呈現(xiàn)在圖中左側(cè)的窗口450至600納米的光譜曲線。 熒光蛋白生物傳感器的卡通插圖出現(xiàn)在圖的右側(cè)，綠色鈣離子下方。 青色熒光蛋白（ECFP）由青色桶表示與黃色熒光蛋白（EYFP）是由當(dāng)FRET發(fā)生黃色桶表示（它是否則灰色）。 從連續(xù)的10納米波段組成一個(gè)lambda堆棧的圖像呈現(xiàn)在主窗口下方。 為了操作的教程，使用FRET進(jìn)度滑塊來增加鈣離子濃度，并喚起了結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變，產(chǎn)生FRET的生物傳感器。注意在lambda棧波段作為FRET的程度增加變化到細(xì)胞核的強(qiáng)度。

在FRET顯微鏡遇到的復(fù)雜的信號被認(rèn)為是為了進(jìn)行共振能量轉(zhuǎn)移所必需的熒光基團(tuán)的過量光譜重疊的混淆。 因此，除了光譜成像，以在多色固定和活細(xì)胞中分離熒光光譜的能力，該技術(shù)是**地適于解開發(fā)射捐款在FRET成像供體和受體熒光團(tuán)。 配備多陽極探測器現(xiàn)代高性能共聚焦顯微鏡特別適用于FRET分析，由于其高率圖像捕獲，調(diào)查熒光蛋白的生物傳感器是在毫秒級操作時(shí)，這是經(jīng)常需要的。 與32通道多陽極探測器，光譜成像共焦顯微鏡可以在一次掃描中兩種熒光FRET收購整個(gè)光譜響應(yīng)。 然而，即使光譜成像能夠在FRET同時(shí)檢測這兩種熒光團(tuán)的發(fā)射信號，該技術(shù)是無法通過能量轉(zhuǎn)移和信號源于直接激發(fā)產(chǎn)生的受體發(fā)射之間進(jìn)行區(qū)分。 因此，使用分別表示供體和受體的蛋白質(zhì)適當(dāng)?shù)目刂剖潜匾亩糠治觥?/span> 在光譜成像是用來評估FRET中表達(dá)為單個(gè)多肽熒光蛋白的生物傳感器的情況下，控制是不太重要的。