尼康顯微鏡匹配熒光探針與熒光濾光片塊

 現(xiàn)代熒光顯微鏡儀器采用的干涉濾光片和一個(gè)二色分束器，以滿足用于標(biāo)記樣品中的熒光探針（次）的激發(fā)和發(fā)射要求的組合。 當(dāng)這些部件被適當(dāng)?shù)剡x擇，在顯微鏡提供了標(biāo)本的熒光基團(tuán)的有選擇性的激勵(lì)，并且所必需的圖像形成弱得多的熒光發(fā)射后續(xù)隔離的基本機(jī)制。 通過(guò)仔細(xì)的雙色分束器的功能相匹配的激發(fā)和發(fā)射濾波器的性能，實(shí)驗(yàn)組樣品特征進(jìn)行成像上一個(gè)黑暗的背景和*高的靈敏度。 這種互動(dòng)式教學(xué)讓參觀者以確定*佳的選擇，目前尼康熒光濾塊中*大化的激發(fā)和發(fā)射效率與特定的熒光探針。

操作教程，首先選擇使用的教程窗口的右側(cè)尼康濾鏡設(shè)置下拉菜單中的濾鏡組合。 下一步，選擇一個(gè)家庭使用的探頭級(jí)下拉菜單的熒光染料。 對(duì)于每個(gè)類(lèi)探頭，選擇熒光基團(tuán)是通過(guò)熒光團(tuán)下拉菜單（：更快的操作，選擇所需的探頭后，通過(guò)使用向上和向下箭頭鍵的過(guò)濾器設(shè)置選擇切換快速提示 ）提供訪問(wèn)。 

本教程初始化與吸收藍(lán)光的熒光探針（的Alexa Fluor 488）疊加在光譜表征一個(gè)合適的尼康過(guò)濾器在題為光譜信息的圖形設(shè)置的光譜范圍。 所選擇的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的歸一化強(qiáng)度被顯示在右側(cè)圖中縱坐標(biāo)（ 相對(duì)強(qiáng)度 ），而在左側(cè)縱坐標(biāo)表示的光譜透射數(shù)值所選擇的濾波器組合（ 透射率 ）的組件。 譜橫截面是通過(guò)激發(fā)和發(fā)射重疊區(qū)域的藍(lán)色和紅色光的陰影，表示分別。 激發(fā)截面（藍(lán)色）對(duì)應(yīng)的熒光團(tuán)的吸收和激發(fā)濾光片透射區(qū)域之間的重疊，而橫截面為發(fā)射（紅色）表示的熒光發(fā)射和發(fā)射濾光片透射區(qū)域的重疊部分。 每個(gè)橫截面重疊的顏色可以使用激發(fā)和發(fā)射復(fù)選框來(lái)打開(kāi)和關(guān)閉獨(dú)立。 當(dāng)任一熒光團(tuán)光譜復(fù)選框被關(guān)閉，除去熒光基團(tuán)的吸收和/或發(fā)射光譜的顏色陰影也同樣去除。 譜為個(gè)體濾波器組部件也可以通過(guò)從濾波器光譜的復(fù)選框中除去相應(yīng)的復(fù)選標(biāo)記刪除。 傳輸曲線的勵(lì)磁 ， 分色 ，和發(fā)射極標(biāo)示為藍(lán)色，綠色和紅色，分別，并打開(kāi)和關(guān)閉與相應(yīng)的復(fù)選框。 請(qǐng)注意，設(shè)置頻譜參數(shù)和熒光探針?lè)逯挡ㄩL(zhǎng)的激發(fā)和發(fā)射的重要濾波器旁濾和探頭復(fù)選框表示。