尼康顯微鏡匹配熒光探針與熒光濾光片塊

 現(xiàn)代熒光顯微鏡儀器采用的干涉濾光片和一個二色分束器，以滿足用于標記樣品中的熒光探針（次）的激發(fā)和發(fā)射要求的組合。 當這些部件被適當?shù)剡x擇，在顯微鏡提供了標本的熒光基團的有選擇性的激勵，并且所必需的圖像形成弱得多的熒光發(fā)射后續(xù)隔離的基本機制。 通過仔細的雙色分束器的功能相匹配的激發(fā)和發(fā)射濾波器的性能，實驗組樣品特征進行成像上一個黑暗的背景和*高的靈敏度。 這種互動式教學讓參觀者以確定*佳的選擇，目前尼康熒光濾塊中*大化的激發(fā)和發(fā)射效率與特定的熒光探針。

操作教程，首先選擇使用的教程窗口的右側(cè)尼康濾鏡設(shè)置下拉菜單中的濾鏡組合。 下一步，選擇一個家庭使用的探頭級下拉菜單的熒光染料。 對于每個類探頭，選擇熒光基團是通過熒光團下拉菜單（：更快的操作，選擇所需的探頭后，通過使用向上和向下箭頭鍵的過濾器設(shè)置選擇切換快速提示 ）提供訪問。 

本教程初始化與吸收藍光的熒光探針（的Alexa Fluor 488）疊加在光譜表征一個合適的尼康過濾器在題為光譜信息的圖形設(shè)置的光譜范圍。 所選擇的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的歸一化強度被顯示在右側(cè)圖中縱坐標（ 相對強度 ），而在左側(cè)縱坐標表示的光譜透射數(shù)值所選擇的濾波器組合（ 透射率 ）的組件。 譜橫截面是通過激發(fā)和發(fā)射重疊區(qū)域的藍色和紅色光的陰影，表示分別。 激發(fā)截面（藍色）對應的熒光團的吸收和激發(fā)濾光片透射區(qū)域之間的重疊，而橫截面為發(fā)射（紅色）表示的熒光發(fā)射和發(fā)射濾光片透射區(qū)域的重疊部分。 每個橫截面重疊的顏色可以使用激發(fā)和發(fā)射復選框來打開和關(guān)閉獨立。 當任一熒光團光譜復選框被關(guān)閉，除去熒光基團的吸收和/或發(fā)射光譜的顏色陰影也同樣去除。 譜為個體濾波器組部件也可以通過從濾波器光譜的復選框中除去相應的復選標記刪除。 傳輸曲線的勵磁 ， 分色 ，和發(fā)射極標示為藍色，綠色和紅色，分別，并打開和關(guān)閉與相應的復選框。 請注意，設(shè)置頻譜參數(shù)和熒光探針峰值波長的激發(fā)和發(fā)射的重要濾波器旁濾和探頭復選框表示。