徠卡顯微鏡激發(fā)共聚焦
熒光激發(fā)需要專門的彩色光：它應(yīng)該有效地激發(fā)探頭（接近激發(fā)*大值），但留出空間，收集沒有蔓延到檢測路徑的排放。 在激光共聚焦顯微鏡，是用經(jīng)典的多行激光或激光“電池”。 這種安排需要挑選所需的線，適合當(dāng)前使用的熒光裝置。 強(qiáng)度控制是必須完成的另一項(xiàng)任務(wù) - *激光器將顯示增加的噪聲強(qiáng)度時(shí)，是在源頭直接控制。 的聲光可調(diào)諧濾波器的引入簡化了過濾，并在同一時(shí)間顯著改善的靈活性。
濾光輪 - 早期的方法
光源，用于在共聚焦顯微鏡熒光激發(fā)是激光器或激光器具有不同顏色的組合。激光器用于技術(shù)原因。 不幸的是，傳統(tǒng)的激光器發(fā)射出通常只有一個(gè)單一的波長，或只有幾行（一個(gè)現(xiàn)代化的解決方案是白光激光器）。 然而，用在生物醫(yī)學(xué)成像表演激發(fā)帶在近紫外和近紅外的光譜中的任何地方熒光染料。 在大多數(shù)情況下，有必要從幾個(gè)不同的熒光染料在同一時(shí)間拍攝的排放。 為了完成這個(gè)任務(wù)，一系列的激光束是由二向色鏡組合。 在這種情況下，反射鏡采用的是逆模式相比，“分束器”分隔的激發(fā)和發(fā)射光的熒光照明。（本文來源：徠卡顯微鏡激發(fā)共聚焦）
由于激光器一般有低噪音運(yùn)行一個(gè)可比窄帶，這是不可取的，直接由激光功率控制力度。 因此，一個(gè)設(shè)備是必要的，使激光強(qiáng)度來單獨(dú)地衰減。 類似地，如果源被關(guān)斷激光壽命將減少，并且在許多次。 氣體激光器特別是不要在高溫下承受功率時(shí)仍。
一個(gè)典型的實(shí)現(xiàn)所有這些要求是“激光電池”，由一系列激光（一般為3?5）。 所有激光器都配備了驅(qū)動(dòng)機(jī)電和控制軟件的光閘。 所有的激光器需要一種伺服控制裝置 - 用于衰減 - 一個(gè)車輪或滑塊與灰色濾波器的序列。 多行激光器需要在另外一個(gè)滾輪或滑塊的，它包含了一系列的邊緣和帶通濾波器，以挑線單行或組合。
很顯然，整個(gè)安裝程序可以變得稍微拜占庭，很容易出現(xiàn)偏差和漂移的問題，它可能會(huì)在過濾器選擇引進(jìn)的機(jī)械振動(dòng)。 這也是很慢的時(shí)候光照制度需要進(jìn)行修改，并且由于適合在滾輪或滑塊過濾器數(shù)量有限，設(shè)備也很靈活。
圖1：古典“激光電池”5激光管，5機(jī)械光閘，8組束鏡，5衰減濾光輪和1線選擇濾光輪為多參數(shù)共聚焦顯微鏡。
聲光可調(diào)濾光器 - 操作方法
簡化的機(jī)械安裝和數(shù)量級(jí)增加靈活性顯著步驟是一個(gè)聲光濾波器（AOTF）的實(shí)施情況。 基本上，一個(gè)AOTF是一種裝置，使得所需的顏色來進(jìn)行控制，以指向不同的方向，而顏色的其余部分直接通過AOTF中。 的AOTF是由一個(gè)晶體，通常TEO 2，SiO 2等或其它化合物具有類似性質(zhì)。 該晶體是由一種機(jī)械波在幾百M(fèi)Hz范圍內(nèi)通過機(jī)械換能器（術(shù)語“聲波”指的是機(jī)械波，雖然頻率沒有達(dá)到我們所標(biāo)記為可聽見的聲學(xué)）激發(fā)。 *重要的是，在該期望的光束被偏轉(zhuǎn)的方向是固定的，并且不依賴于光的顏色。 和作為一個(gè)額外的好處，光的，應(yīng)該在被請求的方向指向的量是可控的機(jī)械波的幅度。
在與（準(zhǔn)直）的激光線的各種波長的，由“激光電池”的規(guī)定的照射下，AOTF使被拾起并針對所請求的方向上的充分強(qiáng)度的任何所需部分的任何線路。 因此能夠真正同時(shí)選擇多個(gè)行。 數(shù)量主要取決于電子設(shè)備的數(shù)量一個(gè)是準(zhǔn)備投資。 體面的系統(tǒng)同時(shí)提供8行。
總體而言，AOTF完全取代了單晶的機(jī)械固定在上述所有的百葉窗，衰減器和行選擇器。 行的任何組合是很容易選擇的，當(dāng)該激光電池提供總共8條線，組合的數(shù)量達(dá)到256 - 而不是與AOTF問題。 加：每個(gè)選定的線路是在強(qiáng)度無級(jí)控制。 在本質(zhì)上，AOTF是一個(gè)“8通道激光調(diào)光器”。
工程師們可能會(huì)說，AOTF指示不同方向的兩個(gè)偏振模。 這是完全正確的，但不損害概念。 激光器反正偏振光，因此光將始終指向所希望的方向。 垂直方向?qū)⒈３挚盏?，沒有任何后果。
圖 2：聲光濾波器（盒右側(cè)）取代了傳統(tǒng)的電池激光共聚焦照明所有的百葉窗，衰減器和行選擇器。 任何輸入AOTF的線路可以被抑制，減弱或用于在共聚焦顯微鏡使用完全傳送。 由激光器發(fā)出的線的任何組合可以被組合（一個(gè)非常高的，雖然組合有限數(shù)量）。
AOTF - 免費(fèi)額外的好處
圖3：掃描感興趣區(qū)域用不同的激光線或同一行的不同強(qiáng)度。 在逐行掃描中，照明政權(quán)在預(yù)設(shè)點(diǎn)根據(jù)預(yù)定義的模式改變。 的任意組合是可能的，在幾乎任何圖案，這是由手帶圖形光標(biāo)繪制到一個(gè)預(yù)掃描圖象。 當(dāng)然，幾何圖案可被施加，以及（矩形，圓形，橢圓形...）。“零線”也是一個(gè)圖案，并經(jīng)常用于保護(hù)背景細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物。
除了明顯的好處，即AOBS允許任何激光器組合，該特定樣品中適合的熒光染料的組合物，它具有進(jìn)一步的好處。 讓我們假定該標(biāo)本染色用兩種不同的熒光染料，是一個(gè)非常強(qiáng)有力的和其他的相當(dāng)弱。 在這里，無級(jí)亮度調(diào)整使得熒光發(fā)射，以便在類似的強(qiáng)度由調(diào)光激發(fā)的染料鮮艷，記錄兩者的熒光進(jìn)行平衡。 這是很容易可以在網(wǎng)上，在成像過程中。 AOTF的控制速度快，不需要掃描進(jìn)程停止。
通過無級(jí)亮度調(diào)節(jié)平衡的激勵(lì)，不僅有利于對的熒光通道可比性，這也是一個(gè)有價(jià)值的工具，以提高熒光的分離。 許多染料顯示在他們的發(fā)射光譜，導(dǎo)致了錯(cuò)誤的染料被拾起在右聲道長“尾巴”。 通過降低勵(lì)磁到*低限度，分離可以提高（降低串?dāng)_）。
*后，集中選擇線（和強(qiáng)度）之間的開關(guān)速度非?？?- 在幾微秒;相比大約一秒鐘為標(biāo)準(zhǔn)的機(jī)械過濾器的輪子。 這種快速開關(guān)允許照明政權(quán)（這在什么強(qiáng)度線）一行的掃描過程中被改變。 此功能是用來描繪出不同的照明顏色圖案在樣品上，所謂的“感興趣區(qū)域”，不同的激光器是積極的。 它也可以用來“變黑”，其中沒有信號(hào)要被記錄的區(qū)域。 這樣可以使樣品活著后研究這些地區(qū)。 在這篇文章的開頭圖為利益，其中5種不同的參數(shù)設(shè)置是否在單次掃描得到應(yīng)用，例如區(qū)域。