徠卡顯微鏡，激光顯微切割（LMD）和花式應(yīng)用
新的和深遠(yuǎn)的應(yīng)用*近已開(kāi)辟了激光顯微切割領(lǐng)域。除了常規(guī)的解剖，徠卡激光顯微切割系統(tǒng)（LMD）是一個(gè)很好的工具，標(biāo)記相關(guān)的結(jié)構(gòu)，提供非常具體的激光操控選定的區(qū)域。 這種激光打標(biāo)功能的應(yīng)用，如CLEM，NanoSIMS以及在活細(xì)胞扇區(qū)是有用的。 下面簡(jiǎn)要概述顯示了如何這樣復(fù)雜的挑戰(zhàn)可與LMD組合來(lái)掌握。
CLEM（相關(guān)光學(xué)和電子顯微鏡）和LMD - 標(biāo)結(jié)構(gòu)的快速和精確追蹤
越來(lái)越多的蛋白質(zhì)和細(xì)胞器研究在細(xì)胞生物學(xué)的復(fù)雜性，有時(shí)需要不同的成像方法的組合。 部分CLEM方法尤其夫婦技術(shù)，如光學(xué)和電子顯微鏡。 的主要目的是顯示用光學(xué)顯微鏡在電子顯微鏡水平，即在活細(xì)胞的動(dòng)態(tài)活動(dòng)與*微結(jié)構(gòu)和三維信息的相關(guān)獲得的圖像。 使用LMD中，參考坐標(biāo)系統(tǒng)可以產(chǎn)生一個(gè)培養(yǎng)基材樣品制備過(guò)程中，使標(biāo)記的細(xì)節(jié)快速和精確的位置的表面上。 這個(gè)過(guò)程是在圖1所示的令人印象深刻。
圖。 1：參考網(wǎng)格壓印到細(xì)胞培養(yǎng)基材。 （一）參考網(wǎng)格的激光顯微切割顯微鏡的計(jì)劃。 該圖案化基板ACLAR用激發(fā)濾波器BP三十零分之五百四十五（B）的落射熒光顯微鏡下成像，BP四十零分之四百八十○（C）和BP四十分之三百六十〇（D）。 電網(wǎng)熒光比標(biāo)簽蛋白的GFP信號(hào)非常微弱。（E）參考網(wǎng)格是可見(jiàn)的明場(chǎng)和用掃描電子顯微鏡（F）。 （G-I）由于ACLAR的融化，正面和負(fù)面的圖案被印如通過(guò)掃描EM（G）。 因此，聚合，除去培養(yǎng)劑（H）后，該模式將顯示為陰性和陽(yáng)性痕跡留下明顯漏洞（我）在*個(gè)EM的部分。 （J）的圖片的預(yù)規(guī)則化襯底安裝到金的鍍活細(xì)胞的載體
NanoSIMS - 結(jié)構(gòu)在第三維
使用NanoSIMS（納米二次離子質(zhì)譜法），加上LMD和AFM（原子力顯微鏡）來(lái)獲得元件和一個(gè)空間分辨率<50nm的樣品的同位素組成的一個(gè)三維圖像進(jìn)行細(xì)菌分析。 的LMD方法證明是有利這里，也：激光產(chǎn)生的過(guò)濾器的表面上的網(wǎng)格圖形中使用，以標(biāo)記感興趣的結(jié)構(gòu)（圖2）。 此方法用于在海洋生物學(xué)，例如，分析碳和氮固定在太平洋和波羅的海
圖。 2：用激光顯微切割（LMD）體系催化記者沉積（CARD）-FISH和納米尺度的二次離子質(zhì)譜（NanoSIMS）篩選標(biāo)記分析了相同的過(guò)濾器位置。 小盒子圖為13 C-結(jié)合細(xì)胞（紅色）的NanoSIMS圖像疊加在古菌為細(xì)胞的檢測(cè)CARD-FISH圖像。 每個(gè)網(wǎng)格的大小是大約50×50微米的帶標(biāo)記的LMD系統(tǒng)
LMD在活細(xì)胞研究 - 為“蓄意破壞”的方法
徠卡LMD也是在活細(xì)胞領(lǐng)域的蜂窩結(jié)構(gòu)，如中心體，微管和膜的蓄意破壞機(jī)械特別有用。 例如，細(xì)胞膜，可以用激光穿孔，以允許先前完全由膜堵塞的物質(zhì)的滲透，根據(jù)教授 莫妮卡總得從遺傳醫(yī)學(xué)和日內(nèi)瓦大學(xué)發(fā)展部。 *重要的是，它可以在細(xì)胞分裂過(guò)程（圖3）來(lái)操縱細(xì)胞的主軸裝置。
圖。 3：有絲分裂紡錘體消融在野生型單細(xì)胞胚胎。 一個(gè)C。 線蟲(chóng) 1 -細(xì)胞胚胎表達(dá)α-微管蛋白融合到綠色熒光蛋白。 有絲分裂紡錘體剛剛之前（a）和激光燒蝕（b）之后。 這兩個(gè)紡錘體兩極消融后分離