徠卡顯微鏡,CARS顯微成像特點(diǎn)分子振動(dòng)對(duì)比

2020-09-04 09:53:36

 相干反斯托克斯拉曼散射(CARS)顯微鏡是一種技術(shù),分子的振動(dòng)簽名的基礎(chǔ)上生成圖像。這種成像方法不要求標(biāo)注的,但重要的生物分子的化合物的范圍內(nèi),可以得到分子的特定信息。本文簡(jiǎn)要地強(qiáng)調(diào)汽車的功能,并討論了一些令人興奮的成像引入這種新的成像方法的可能性。

奧林巴斯顯微鏡

 

探測(cè)分子的振動(dòng)

分子的化學(xué)鍵能撼動(dòng),彎曲和撥浪鼓。他們做這些運(yùn)動(dòng)特別是利率或頻率。這些頻率是如此特別,我們可以找出什么樣的化學(xué)鍵是劍拔***張到其特定的振動(dòng)頻率調(diào)諧。例如,許多有機(jī)分子中含有碳和氫原子之間的債券,因此,他們有CH振動(dòng)。更重要的是,C-H鍵的振動(dòng)頻率是非常不同于其他化學(xué)鍵的振蕩運(yùn)動(dòng),如O-H鍵,氧 - 氫鍵。換言之,通過檢查一個(gè)分子的振動(dòng)頻率時(shí),我們可以說有關(guān)化學(xué)結(jié)構(gòu)的分子的顯著的東西。這樣的振動(dòng)分析對(duì)應(yīng)的化學(xué)分析。

這些振動(dòng)可以得到解決,通過檢查與光分子。不幸的是,分子振動(dòng)的頻率比可見光波的振蕩頻率要低得多。這意味著,我們不能直接收聽到這些分子的議案,包括常見的光源類型的激光器,光學(xué)顯微鏡的一部分。然而,分子可以以間接的方式進(jìn)行檢查。拉曼光譜是這種間接檢查的一個(gè)例子。在拉曼光譜和顯微鏡,現(xiàn)有的激光束處理樣品和關(guān)閉分子散射的光分析。這是一種不同的顏色比激發(fā)光的散射光可能包含的分子振動(dòng)的信息。這種方法看起來非常相似,熒光測(cè)量,但收集到的信息是非常不同的。在拉曼光譜的激光拉曼散射光之間的頻率差對(duì)應(yīng)的頻率的化學(xué)鍵。使用適當(dāng)?shù)倪^濾器和能譜儀,它是可以自信地收集拉曼散射光在光學(xué)顯微鏡下,從而收集有關(guān)樣本的化學(xué)信息。這提供了**的可能性。由于幾乎所有的分子具有特定的化學(xué)鍵的振動(dòng)是拉曼活性,這是可能的,而不需要任何外在的標(biāo)簽生成的樣品的化學(xué)地圖。毫不奇怪,這一功能已經(jīng)引發(fā)了許多研究學(xué)科,包括材料合成,法醫(yī)研究,礦物學(xué),毒理學(xué)和化學(xué)分析藝術(shù)品的利益。

拉曼光譜儀和顯微鏡還可以在生物學(xué)產(chǎn)生了影響。拉曼顯微鏡使標(biāo)簽的方式,這將打開機(jī)會(huì)對(duì)研究生物樣品,難以染色或準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)的光學(xué)檢測(cè)的細(xì)胞和組織的研究。比如,拉曼光譜儀已被證明是足夠敏感的健康和癌組織的化學(xué)組成的細(xì)微的差別。拉曼顯微鏡盡管其生物研究的巨大潛力,還沒有完全成熟,成為一個(gè)常規(guī)成像技術(shù)在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。拉曼顯微鏡在組織和細(xì)胞研究的影響有限的原因是拉曼信號(hào)的固有弱點(diǎn)。因?yàn)榧す饫?yīng)探測(cè)分子間接:沒有光的分子振動(dòng)的共振信號(hào)弱。拉曼效應(yīng)是可測(cè)量的,但是,相對(duì)于熒光,這是一個(gè)非常弱的效果。這意味著,記錄的拉曼圖像需要更長(zhǎng)的時(shí)間比服用的熒光圖像。在一秒鐘內(nèi)可以采取,而多數(shù)的熒光圖像,拉曼圖像相同的尺寸會(huì)需要一個(gè)小時(shí)或更多。顯然,這樣的圖像的采集時(shí)間是非常有吸引力的生物成像應(yīng)用。

CARS顯微鏡使新的見解,生物和材料樣品

這是否意味著,拉曼顯微鏡有沒有快速生物成像領(lǐng)域的未來?幸運(yùn)的是,有替代拉曼技術(shù),顯著提高的信號(hào)電平。非線性拉曼技術(shù)利用*快脈沖激光,和更有效的方式探測(cè)中的分子的振動(dòng)響應(yīng)。物理,非線性拉曼技術(shù)使分子振動(dòng)步調(diào)一致,產(chǎn)生相干信號(hào),*多可以有5個(gè)數(shù)量級(jí)高于常規(guī)拉曼光譜。有幾個(gè)非線性拉曼光譜技術(shù),如相干反斯托克斯拉曼散射(CARS)和受激拉曼散射(SRS),所有這些探測(cè)相同的拉曼活性的分子振動(dòng)。這些技術(shù)絕不是新的:在20世紀(jì)60年代奠定基礎(chǔ)的非線性拉曼方法。在家庭內(nèi)部的非線性拉曼方法,汽車是*種方法,已經(jīng)成長(zhǎng)為一個(gè)用戶友好的顯微鏡工具。*CARS顯微鏡的歷史可以追溯到1982年,但*個(gè)有用的生物實(shí)施表現(xiàn)出了一點(diǎn),在十多年前,1999年。從那時(shí)起,CARS顯微鏡技術(shù)已經(jīng)成熟到一個(gè)易于使用的成像工具,強(qiáng)調(diào)發(fā)布的徠卡TCS CARS顯微鏡,它增加了光學(xué)顯微鏡的調(diào)色板實(shí)時(shí)振動(dòng)對(duì)比。汽車的成像方式,提供快速和清脆什么可預(yù)期的共聚焦熒光顯微鏡圖像。手頭有了這樣的成像能力,一個(gè)**的成像應(yīng)用領(lǐng)域指日可待。

脂質(zhì)和蛋白質(zhì)

CARS顯微鏡的應(yīng)用范圍是什么?CARS顯微鏡已經(jīng)取得了顯著的影響,在該地區(qū)的脂質(zhì)成像。脂類可以可視化調(diào)整到CH 2對(duì)稱伸縮振動(dòng)的脂肪分子。對(duì)于實(shí)施例中,CARS顯微鏡可以區(qū)分飽和的和不飽和的脂肪,它可以選擇性地檢測(cè)膽固醇和膽甾醇酯,它可以揭示脂膜的填充密度的信息。CARS顯微鏡是不夠敏感,拿起信號(hào)從單一磷脂膜,使膜生物物理學(xué)的研究中,囊泡運(yùn)輸和細(xì)胞器的映射。強(qiáng)勁的汽車脂質(zhì)信號(hào)也促使研究脂質(zhì)代謝,細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)體販運(yùn),并專注于脂質(zhì)積累和腫瘤生長(zhǎng)之間的相關(guān)性的研究。*顯著,**的CARS信號(hào)從富含脂質(zhì)的髓鞘透露了幾個(gè)重要的進(jìn)展和治療的neurodegenerate疾病的見解。

另一個(gè)振動(dòng)響應(yīng),有利的是蛋白質(zhì)。CARS顯微鏡雖然無法得出結(jié)論鑒別蛋白質(zhì),它是未能生成地圖的蛋白質(zhì)密度。CH 3甲基伸縮振動(dòng)手柄映射出的蛋白質(zhì)在組織和細(xì)胞中分布提供了方便。病變組織蛋白密度的空間分布往往是重要標(biāo)志。

 

  • 奧林巴斯顯微鏡

  • 圖1:在M1巨噬細(xì)胞脂質(zhì)積累。巨噬細(xì)胞中生長(zhǎng)在培養(yǎng)基中含有氧化型低密度脂蛋白。血脂是通過2845厘米-1 CH 2振動(dòng)的脂肪血脂是顯性可視化。

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  • 圖2:腎組織多式聯(lián)運(yùn)非線性顯微鏡。雙光子激發(fā)自體熒光(綠色)用于突出顯示在腎小管細(xì)胞,而CARS信號(hào)用于指示在組織間質(zhì)的脂質(zhì)。

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  • 圖3:CARS圖像的纖維素纖維。該纖維是通過纖維素鏈的多聚葡萄糖的C-H振動(dòng)的可視化。

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  • 圖4:血脂線蟲分布。明亮的信號(hào)CH 2對(duì)稱伸縮振動(dòng)脂肪脂質(zhì)。

 

水和藥物的擴(kuò)散

CARS顯微鏡也被用來監(jiān)測(cè)水動(dòng)力學(xué),生物和合成系統(tǒng)的*方法。組織水的O-H伸縮振動(dòng)提供了一個(gè)敏感的探頭。這使水的滲透研究,以單核細(xì)胞和細(xì)胞器,除了水分動(dòng)態(tài)的設(shè)計(jì)的微結(jié)構(gòu)材料。 

CARS顯微鏡無標(biāo)記性和無創(chuàng)性使得該技術(shù)非常適合用于監(jiān)測(cè)在體內(nèi)通過皮膚局部應(yīng)用的化學(xué)品滲透。CARS已被用于后續(xù)的礦物油中的擴(kuò)散,通過皮膚[ 8 ] 在動(dòng)物模型中,*近也被證明工作在皮膚上的人類患者的方法。

聚合物薄膜和納米粒子

除了 標(biāo)簽自由的化學(xué)成像的組織和細(xì)胞,CARS顯微鏡已經(jīng)采用聚合物膜的化學(xué)組成和制造微結(jié)構(gòu)的可視化。對(duì)比度可以是來自于聚合物中的碳網(wǎng)的振動(dòng),或從羰基的有機(jī)分子。CARS信號(hào)從許多聚合物結(jié)構(gòu)足夠堅(jiān)固,以用于廣泛的各種的振動(dòng)拉曼簽名為成像的目的撥號(hào)。此外,CARS顯微鏡可以探測(cè)分子系統(tǒng),具有很強(qiáng)的吸收功能。碳納米管,例如,可以單獨(dú)可視化在CARS顯微鏡。同樣地,半導(dǎo)體納米粒子,如硅和鐵的氧化物納米結(jié)構(gòu)可以可視化的一個(gè)由一基于非線性CARS響應(yīng)。重要的是,的CARS信號(hào)從這些納米粒子的不擔(dān)保持續(xù)的樣品成像不衰落的對(duì)比度的情況下,光漂白。這些實(shí)施例說明成像CARS顯微鏡在材料科學(xué)中的應(yīng)用,有一個(gè)廣泛的。

的非線性拉曼顯微鏡,熒光顯微鏡相比,是相對(duì)比較年輕。盡管如此,非線性拉曼技術(shù)的影響已經(jīng)可以聽到響亮而明確的,特別是在無標(biāo)記生物組織成像。而不是與熒光技術(shù)的競(jìng)爭(zhēng),能夠迅速產(chǎn)生振動(dòng)的對(duì)比基礎(chǔ)上的圖像增加了一個(gè)新的層面,對(duì)現(xiàn)有的光學(xué)顯微鏡對(duì)比機(jī)制。汽車成像方式的商業(yè)化提供給顯微鏡更多選項(xiàng)檢查照明樣品的微觀細(xì)節(jié)。與新的對(duì)比來新的發(fā)現(xiàn)。這是令人興奮怎么看CARS顯微鏡等技術(shù),還可以擴(kuò)大我們對(duì)微觀世界的認(rèn)識(shí)。