奧林巴斯顯微鏡成像，曝光和色彩平衡錯誤的故障排除

曝光和色彩平衡錯誤是可能發(fā)生的彩色顯微攝影和顯微鏡，業(yè)余和專業(yè)都已經(jīng)遇到的*常見的問題。 一般，源的錯誤是顯而易見的，或可以容易地確定通過折回的步驟導致的顯微照片曝光。

其他類似的錯誤，如倒易律失效，冷凝器畸變，和意想不到的顏色變化不太明顯，往往采取一些廣泛的故障排除，以揭開源。 缺乏適當?shù)纳珳刂g的平衡顯微鏡光源和膜乳液是意想不到的顏色變化在顯微攝影中的*常見的原因之一。 如果光源的色溫太低，膜，顯微照片將有一個整體的淡黃色或偏紅，會出現(xiàn)熱 。 另一方面，當光源的色溫過高的膜，顯微照片將有偏藍，會出現(xiàn)涼爽 。 錯配的程度，將決定這些顏色的變化程度，具有很大的差異，導致極端的顏色變化。

圖1給出了一個乘法染色薄款的苜蓿植物組織，已經(jīng)感染了冠疣菌，Physoderma alfalfae，顯示幾種常見的曝光和色彩平衡錯誤的顯微照片。 曝光不足和曝光過度，兩個錯誤屢有發(fā)生，左手部分深色和淺色領(lǐng)域中的顯微照片圖1所示。 中央右側(cè)部分的顯微照片，顯示一個共同的顏色轉(zhuǎn)變的原因有多種，可以發(fā)生。 表示的帶藍色和黃色區(qū)域的薄膜，這是由于色溫不當?shù)氖褂盟a(chǎn)生的任一鎢膜與鎢光源的的日光光源或日光膠片的色彩平衡錯誤。 這些以及其他類似的錯誤，如使用太沉重染色或太厚的標本，代表*常見的錯誤，所面臨的一個在常規(guī)的顯微鏡顯微照相。 以下各段處理特定錯誤和故障的曝光和色彩平衡的顯微照片和現(xiàn)在建議的補救措施。

色彩平衡錯誤 -測試適當?shù)钠胶怙@微鏡照明，電影的乳液設(shè)計相匹配，是有明確的背景下的顯微照片出現(xiàn)白色。 一個藍色的背景表示色溫過高，而黃色的背景標志著色溫太低。 這個概念被徹底討論的色溫部分的奧林巴斯顯微鏡資源中心顯微鏡底漆 。

使用薄膜還沒有被正確平衡光源的色溫在顯微攝影，可導致不尋常的色彩變化，造成不自然的色調(diào)，沒有忠實地再現(xiàn)，在顯微鏡目鏡看到的顏色。 圖2中的顯微照片表明膠片乳劑和顯微鏡照明光源的色彩平衡之間的過濾器的正確使用方法。 的中心（圖2（b））是感染蘋果黑星病， 蘋果黑星病菌*引起的一個破壞性的疾病的蘋果樹蘋果樹干薄款的顯微照片。

標本染色植物組織設(shè)計的四倍混合物并拍下使用3200 K鎢鹵光源64T FUJICHROME，鎢均衡的透明度（轉(zhuǎn)回或幻燈片）膜。 在左側(cè)（圖2（a））是相同的視場拍攝使用FUJICHROME Velvia的，日光平衡的膜，但具有相同的3200 K的鎢鹵燈。 需要注意的是所有色相轉(zhuǎn)移到較長的波長和整體形象有一定的偏黃。 在右側(cè)的顯微照片（圖2（c）），用相同的顯微鏡，但使用日光平衡的閃光管為光源，F(xiàn)UJICHROME 64T透明膜的。 在這些條件下，圖像有一個整體的藍色的演員，顯得很“酷”。 適當?shù)谋∧みx擇圖2（a）會是FUJICHROME 64T（鎢均衡）和圖2（c），這將是Velvia的FUJICHROME（日光平衡）。

大多數(shù)顯微鏡都配備了產(chǎn)率，色溫度為3200K（匹配室內(nèi)B型膜的色彩平衡），但不適合日光平衡膜的高色溫下，可以設(shè)置為鎢鹵燈。 為了生產(chǎn)光模擬日光品質(zhì)， 過濾器必須被放置在光路中的顏色轉(zhuǎn)換 。 *常見的轉(zhuǎn)換過濾器（生產(chǎn)大增量色溫），是柯達，奧林巴斯顯微鏡，光轉(zhuǎn)換從3200 K至5500 K。80A濾波器，相當于日光平衡濾波器被稱為的LBD過濾，尼康顯微鏡過濾器被稱為的NCB過濾。 請務必使用一個過濾器進行顯微攝影時平衡日光下鎢的電影（3200 K）照明。 其它過濾器可用于降低色溫或小的增量變化，在我們的討論中審查的影響顯微攝影色溫 。

小于調(diào)整色溫是由“微調(diào)”的過濾器，通常被稱為顏色補償或色彩平衡濾波器的，產(chǎn)生的增量變化為100 K 600 K的色溫。 各種過濾器是市售協(xié)助photomicrographer的光學和照明問題，以獲得*高質(zhì)量的圖像補償。許多顯微攝影的顏色變化或管進入光通路插入適當?shù)?strong>柯達雷登的色彩補償濾鏡是可以治愈的。 顯微攝影中常用的其它過濾器，如中性密度，對比度增強，紫外線吸收，熱吸收，紅外，和過濾器的設(shè)計，以協(xié)助加強信息揭示的生物污漬。 這些過濾器可能需要補償，以避免生產(chǎn)彩色顯微照片中的顏色變化。

臨界顯微攝影決定了顏色補償濾波器的顏色變化，這可能會發(fā)生變化的6原色：紅，綠，藍色，青色，品紅色，和黃色的中任一項的用于小心控制。 大多數(shù)情況下，電影批次的變化是*個明顯的新的顯微觀測時的背景顏色。 這種顏色應該是一個中性的白色，和顏色的變化發(fā)生時，他們通常是非常明顯的。 這是一個簡單的事情，與顏色補償過濾器，通過使用一個過濾器的互補色移的背景本校正色彩偏移。 當進行顯微攝影沉重的負荷，使用彩色膠片，這是明智的購買薄膜具有相同的乳液每卷數(shù)量和儲存在冰箱或冰柜中多余的。 然后，可以使用一個測試輥，以確定的彩色平衡變量，應保持不變的其余部分的膜批次。 推薦的程序是沒有補償濾波器，其次通過每個的柯達雷登CC10系列過濾器（CC10R（紅色），CC10G（綠色），CC10B（藍色），CC10C（青色），CC10M的幀暴露暴露一個單一的框架（品紅色），和CC10Y（黃色））。 對齊后在5000 K光表所有七個顯微照片顯示了干凈的白色或非常淺的灰色背景，背景是一個已經(jīng)被正確過濾。 這個概念更詳細的討論，在我們的部分過濾器的彩色顯微攝影 。

在圖3所示的顯微照片顯示色彩校正使用彩色薄款李子樹莖組織感染黑色結(jié)，，由*Apiosporina morbosa（也稱為為Dibotryon morbosum）引起的一種破壞性疾病的梅樹的轉(zhuǎn)移。 圖3（b）所示的圖像時，適當?shù)匦Ｕ纳蜉啺唷?/span> 在左邊的顯微照片（圖3（a））受到一個藍色的演員，這可能是由于輕微的色差溫度的不平衡。 進入顯微鏡的光路中插入一個柯達：雷登CC20Y（黃色）濾波器，在圖3（a）所示的顏色從轉(zhuǎn)移類似于在圖3（b）的顯微照片。 同樣的顯微照片，圖3（c）中，有一個明確的，一個CC10M CC10B補償濾波器組的結(jié)合使用可以得到糾正，帶綠色偏色。

在許多情況下，低密度的顏色補償過濾器可以有效地使用各種染料被污染的組織*薄切片，以提高顏色再現(xiàn)性。 每個試樣必須嘗試和錯誤的基礎(chǔ)上評估的，因為過度使用顏色補償濾波器可導致降解互補的污垢的顏色，可能會呈現(xiàn)一種色調(diào)的背景與。 它通常是可取的，限制試圖使用它們，以提高染色的顏色時，色彩補償濾鏡密度低于CC20。

生物組織的薄切片也常常與一種或多種有機染料染色，有選擇性地增強存在于試樣中的各種功能的可見性。很好的強度和色調(diào)所產(chǎn)生的大多數(shù)生物組織污漬將重現(xiàn)彩色膠片上，但往往會出現(xiàn)一些污漬沖了出來，或有他們的顏色，尤其是在多個染色混合物轉(zhuǎn)移。 在許多情況下，顏色補償過濾器可以幫助恢復大部分或全部失去的顏色，但太多的過濾可以影響鄰近的染色特性的顏色和背景。 這個問題發(fā)生與流行的污漬曙紅，品紅和亞甲基藍，這是不是很好的再現(xiàn)大多數(shù)彩色膠片。 通常情況下，這些染料染色的組織，無論是單獨使用或在混合物中，出現(xiàn)渾濁和色彩飽和度的缺乏。

為了抵消這種效果，顯微鏡使用一個的鐠釹過濾器 ，其中包含稀土元素溶解在玻璃的組合。 釹鐠混合物過濾器除去部分的橙色，棕色，藍色和紅色染色的功能，在試樣的色彩飽和度強度增加的效果，即在可見光光譜區(qū)域。 消光系數(shù)*高的是580和590納米之間的鐠釹過濾器，使過濾器除去大部分的橙色和黃色的顏色，往往暗紅色和藍******調(diào)的彩色薄切片。

圖4（b）給出人結(jié)腸上皮組織染色，曙紅和蘇木精的混合物，和用釹鐠插入顯微鏡光路中的過濾器拍攝的圖像。 注意在此顯微紅色和藍色的色調(diào)相比，對于同一試樣沒有鐠釹過濾器（圖4（a）），其中有一個整體偏黃的色彩飽和度的急劇增加。 嘗試使用色彩補償濾鏡校正圖像一個：CC10B（藍色）和CC10M（洋紅色）相結(jié)合的色彩補償濾鏡是用來去除多（但不是全部）的黃******調(diào)，在圖4（c）所示試樣。 雖然色彩校正顯微照片如圖4（C）接近的質(zhì)量，生產(chǎn)鐠釹過濾器（圖4（b）條），它仍然有輕微的偏黃，缺乏專門的過濾器與豐富的色彩質(zhì)量。

在某些情況下，可以成為背景的生物試樣淺色染色過程期間，不希望的偽影。 為了避免這種情況，顏色補償過濾器可以用于以減去背景顏色，只要它是不是過于飽和。 薄切片染色的另一個問題是著色的安裝介質(zhì)。 制備薄切片，加拿大香脂，大眾媒體通常會轉(zhuǎn)淺黃色，隨著年齡的增長，或整裝標本。 一個藍色的色彩補償濾鏡（CC10-20B）通常會克服這個問題，樣本，除非是一本很厚的整體安裝。 在這種情況下，它可能是不可能完全中和黃色的色調(diào)。

顯微鏡鎢燈不發(fā)出顯著的紫外線的光量，但一些新的鹵鎢燈，除了汞和氙氣燈，產(chǎn)生相當量在300-400納米范圍內(nèi)的紫外線。 紫外線照射，可暴露在許多彩色膠片的感藍乳劑層，導致整體的顯微照片，有一個藍色的演員。 這主要是熒光顯微鏡的問題，但它可以發(fā)生在任何顯微鏡使用高強度的鎢 - 鹵素，汞，或氙氣燈。 為減少紫外線光，使用柯達雷登的2B或2E吸收紫外線輻射的過濾器，在390和415納米以下，分別為。 2B濾波器去除基本上所有的紫外線的波長，只留下可見光照亮標本。 2E過濾器有更廣泛的波長阻塞，也將刪除一些紫色和藍色光波長較短，使得該過濾器不太理想的彩色顯微攝影。

圖5中所示的紫外線光的影響，彩色顯微攝影。 在照片的左（圖5（a））示出了伊紅 - 蘇木精染色薄膜部的神經(jīng)細胞中的人髓質(zhì)。 有一個整體偏藍洋紅色的顯微照片，彌漫著*標本的特點和背景。 將柯達雷登2B濾波器和CC10G的補償過濾器組合成顯微鏡光路后，中央的圖像（圖5（b））。 請注意，這個顯微演示更好的色彩飽和度和更清潔的背景消除偏藍。 試圖糾正單獨色彩的色調(diào)誤差與CC20Y（黃色）顏色補償濾波器，在圖5（c）所示。 注意背景仍然有一個由過濾器不能完全除去的反感偏藍。

近90％的鎢或鎢 - 鹵燈所發(fā)出的輻射發(fā)生的形式，產(chǎn)生熱量，這是與紅外波長。 吸熱過濾器，以補償該工件，可以添加到顯微鏡的光路中，靠近所述照射器，以除去不需要的紅外線的波長和保護顯微鏡的光學元件，過濾器，和試樣不受熱損傷。 某些吸熱的過濾器是由一種特殊類型的派熱克斯耐熱玻璃稱為為Aklo，該吸收紅外線的熱射線，綠色或藍綠色的顏色。 與Aklo的過濾器可能會引入到顯微照片的色彩平衡偏差。 可以得到糾正這種不良的副作用與顏色補償過濾器的吸熱的過濾器的顏色是互補的。 如果從燈殼體，熱過濾器可以去除，這樣做并檢查它在5500■輕型表。 淺綠色熱過濾器可以補償由CC10M或CC20M的洋紅******彩補償濾鏡，藍綠色高溫過濾器，可以補償由淡紅色（CC10R或CC20R）濾波器。 將互補的過濾器熱過濾器的頂部，直到其中一個發(fā)現(xiàn)，正好平衡帶有熱過濾器上的顏色變?yōu)橹行浴?/span> 當插入顯微鏡光路，這種補償濾波器應減輕色彩平衡問題。 一些較新的顯微鏡放回燈箱設(shè)計，以反映熱的分色干擾濾波器。 分色濾光器中，能夠更有效地阻擋熱量比石英或玻璃吸熱過濾器，而不會出現(xiàn)裂紋或斷裂時，顯著量的熱被吸收。 他們也不太容易引起不必要的彩色顯微照片中的顏色變化。

冷凝器色差 -顏色平衡可能會出現(xiàn)錯誤使用阿貝消球差臺下冷凝器，這兩者都缺乏校正色差時，在顯微攝影。 即使在顯微鏡已正確配置科勒照明和冷凝器和現(xiàn)場光圈隔膜有正確的光圈大小和位置，圖像會出現(xiàn)藍色或紅色的視場光闌葉片邊緣附近的重點。 這的神器是由于色差，會影響整體的形象和色彩平衡上的顯微照片，有顯著的影響。 稍微向上或向下移動顯微鏡焦點將導致附近的視場光闌葉片被翻譯作為冷凝器轉(zhuǎn)移至紅黃色變?yōu)樗{色的顏色過渡。 色差色偏文物，可以通過適當?shù)倪^濾成功刪除，但不可能完全消除任何機制改進聚光光學校正像差錯誤。 銘記這一點，謹慎行事時，進行阿貝和齊明冷凝器的彩色顯微攝影。

通過仔細選擇冷凝器的位置，產(chǎn)生了輕微的紅色邊緣，只是里面的形象視場光闌葉片和相應的藍色外刀片定位密切邊緣像差的影響可以*小化。 雖然這不會消除神器，這將有助于彌補每種顏色移位，并產(chǎn)生一個較為中性的色彩平衡的顯微照片，甚至可以進一步改善色彩補償濾鏡。 阿貝或齊明冷凝器是一致的定位，重要的是確保這些冷凝器的顯微照片中再現(xiàn)的色彩質(zhì)量。

圖6給出了一系列的彩色葉薄款阿貝聚光疊加在視場光闌的顯微照片。 在左邊的顯微照片（圖圖6（a））示出的位置，以產(chǎn)生一個紅色的邊緣附近的視場光闌葉片，冷凝器的顯微照片的中心（圖6（b））所示的位置與葉片附近的藍色的條紋。 在右側(cè)（圖圖6（c）），紅色條紋出現(xiàn)的視場光闌葉片和藍色的條紋的另一一側(cè)上。 這發(fā)生在冷凝器或燈絲與光軸位置，是一個很好的測試顯微鏡對準。

具有較高程度的光學校正（平場消色差和消色差消球差）的冷凝器推薦高品質(zhì)的彩色顯微攝影。 然而，當它是需要使用低級校正冷凝器，小心地保持的的顯微攝影會話和使用顏色補償過濾器，以減少造成色差的顏色工件在相同的位置在整個冷凝器的孔徑光闌的開口的大小和高度。

互惠失敗的錯誤 -大多數(shù)彩色膠片乳液，旨在短時間暴露在光線下，通常范圍從1/500秒和1/2秒的間隔時間。 在光學顯微鏡中，特別是當改變光過濾器，偏振器，棱鏡，添加在許多的對比度增強模式（相襯，微分干涉對比，霍夫曼調(diào)制對比度等）的光學路徑中，正確的曝光往往較長*過1/2秒。 這部電影的互惠關(guān)系不再成立，而電影需要額外的曝光時間來得到正確的曝光。

這種現(xiàn)象被稱為互易律失效，它發(fā)生在所有的彩色和黑白照相乳劑的成膜速度快，染料的組合物，或鹵化銀濃度無關(guān)。 “失敗”只是表明曝光時間和光強度之間的線性關(guān)系不再成立，并不表示電影乳液在性能方面的失敗。 顯微鏡的照明水平的變化在膜反應有時也被稱為長曝光效果和短曝光效果 。 在低光照條件下（典型的在高放大倍率的熒光顯微鏡和偏光顯微鏡），曝光時間必須經(jīng)常被擴展到顯著的膠片速度損失點。 極短的曝光產(chǎn)生同樣的效果。 大多數(shù)膜也顯示已曝光的鹵化銀晶粒，形成更小的潛像的中心，和一個較低的發(fā)展速度極其短的曝光時間在潛像中心的散射增加。

薄膜制造商的數(shù)據(jù)表和特性曲線表明多少需要額外時間以進行適當曝光。 每個單獨的膜乳液具有調(diào)諧到特定范圍的照度值，其中外面的膜的反應遭到破壞，而在倒易律不再持有的響應。 互易律失效，通?？梢院唵蔚赝ㄟ^黑白膠片的曝光時間或處理條件的增加補償，但是這并不總是與彩色負性和透明度薄膜的情況下。 大多數(shù)彩色膠片有三種顏色敏感的染料層，其中每一個有一個稍微不同的特性曲線的位置和斜率在不同的反應中得到的互易效應可能造成不希望的顏色的變化或管型。 通常情況下，暴露時間和色彩平衡過濾器使用彩色膠片時，必須進行調(diào)整，以補償很長或短的風險。

顯微攝影，很長的曝光時間，經(jīng)常發(fā)生由于低的照度水平，結(jié)果與對比度增強技術(shù)如熒光偏振光，如上所述。 實際上，*過5分鐘的曝光時間并不少見，通常導致倒易律失效。 當使用黑白膠片，計算曝光值可以導致缺乏陰影細節(jié)的底片，但冗長的曝光補償往往產(chǎn)生太多的高光區(qū)域中的密度，從而增加整體對比度。 這是由于這樣的事實，互易律失效的效果大于試樣照明的區(qū)域中是非常低的，可以克服的一個問題，即通過增加膠片顯影的時間量。

在圖7中，示出了一系列的連續(xù)曝光4分鐘（圖圖7（a）），0.25秒（圖7（b）），和0.04秒的互易律失效顏色透明度的顯微照片中的效果（圖7（c ））。 該標本染色，曙紅，蘇木精和成像FUJICHROME 64T鎢平衡的膜，通過柯達E6協(xié)議處理的薄邊的人類睪丸肉瘤。 在很長的曝光時間（使用中性密度過濾器，以減少照明強度），在圖7（a）的顯微照片是黑暗的，缺乏陰影細節(jié)，典型的互易律失效暴露幾分鐘的薄膜上。 在色彩搭配上藍******調(diào)被抑制也有一個明顯的轉(zhuǎn)變。 通過減小曝光時間（或去除的中性密度過濾器），在圖7（b）的顯微照片，它顯示了良好的曝光的結(jié)果，精確的色彩重現(xiàn)的鋒利的試片細節(jié)。 在很短的曝光時間（圖圖7（c）），再倒易律失效的發(fā)生是由于曝光不足，顯微照片是黑暗的，缺乏陰影細節(jié)。

中性密度過濾器，通?？梢允褂门c成功的調(diào)制很短的曝光時間，以避免互易律失效。 然而，護理時應使用中性密度濾光片的彩色顯微攝影曝光時間調(diào)整。 年齡較大的中性密度過濾器可能會取得其隨著年齡的微黃色調(diào)，一些便宜的過濾器，也有某種程度的背景顏色。 如果中性密度濾光片的引入到不正確的色彩平衡已被仔細校準顯微鏡（參見圖圖3（a））的光學路徑的查詢結(jié)果中，使用顏色補償過濾器，以返回到它的適當?shù)钠胶猓陲@微鏡的照明。 此光學因素，如內(nèi)部散射和反射，可能會影響中性密度濾光片的有效密度，導致它們從測得的密度變化。 出于這個原因，重要的是要校正的關(guān)鍵顯微攝影的中性密度濾光片。

有很多種其他因素影響顯微攝影時，使用顏色的透明度和負片色彩平衡。 顏色響應受制造膠片感光特性的變化，如厚度，ISO值和色彩保真度。 乳劑厚度波動是罕見的，但他們確實發(fā)生了，可能會影響在顯微照片的色彩平衡。 膜制造商允許的變化程度通常是小于的柯達雷登CC10補償濾波器的效果，使這些過濾器可使用的乳化劑和ISO變化的校正。 由于乳液的波動可以不同的六種顏色（紅色，綠色，藍色，青色，品紅色，和黃色）中的任何一個，這是一個好主意，有這些過濾器的一組完整的手頭。

彩色膠片可以儲存條件不當也會影響色彩平衡，有時是無法糾正的色彩補償濾鏡或改變曝光時間點。 這是通常的情況下，膜已被破壞時，通過長時間的高溫和/或高濕度，如條件時經(jīng)常發(fā)生的彩色膠片實驗室的貨架上存放很長時間。 彩色膠片比黑白膠片溫度和濕度的損壞更敏感，因為每個三色感光乳劑層，在這些條件下將有不同的反應。 膠片存放不當?shù)挠绊懯遣豢深A知的，可能表現(xiàn)出來的色彩平衡，成膜速度快，或圖像的對比度的變化。 前和暴露后，在冰箱中存儲電影，它始終是一個好主意，特別是如果電影不能立即被處理。

有害化學品的膜，或過量的光的曝光，因此也有有害的影響的顯微照片，這可能是困難的，如果不是不可能的，以糾正。 電影不應該被存放在通風櫥或其他地方可能會受到攻擊揮發(fā)性液體和氣體，如甲醛，丙酮或******。 任何特定的化學物質(zhì)可能對一個給定的膠片感光乳劑的影響是不可預知的。 電影速度可以增加或減少，可以顯著影響的色彩平衡和對比度通常會丟失。 另一個實驗室的危險，尤其是在生物化學，分子生物學，醫(yī)學實驗室，是無意中暴露膜高強度的輻射來源。 這些源包括鈷-60同位素，鐳，和X-射線，通常用在醫(yī)院和一些研究實驗室。 在機場的行李掃描儀還提供了一個輻射危害。 為了避免曝光的電影有潛在危害的輻射來源，不存儲電影的地方正在使用輻射或放射性化學品被安置。 保護膜（既暴露和未曝光），無論是鉛或混凝土屏蔽，在適當?shù)那闆r下，將存儲薄膜盡快進入流通領(lǐng)域。

膜乳劑的特性隨時間變化的，所以大多數(shù)薄膜加蓋在制造過程中的過期日期。 如果適當?shù)乇４嬖诒浠虮?，膜的壽命可以大大增加?/span> 電影應該被放置在密封的容器（鎖定保鮮袋或不透氣的塑料容器就足夠了），小心存放于低流量區(qū)域的冰柜或冰箱，直到它準備要暴露。 膜從冷庫中取出后，總是讓電影前幾個小時開放的存儲容器，以避免受潮損壞，平衡至室溫。 如果妥善保存，膜往往會遠遠*出了建議的截止日期延長期間好。

顯微照片很暗或沖了出去 -曝光的錯誤可能會導致的顯微接收光照不足或太多造成，要么很暗或沖了出去，缺乏標本高亮細節(jié)的圖像。 的試樣的平均亮度，視各不相同，通常感興趣的區(qū)域是不具有代表性的平均場亮度。 作為一個例子，在暗視野顯微鏡標本是明亮的光在黑暗的背景上，影像將被過度曝光，如果不計算曝光補償測光表讀數(shù)。 由此產(chǎn)生的顯微照片，呈現(xiàn)明亮的標本沖了出去，缺乏細節(jié)。 這個錯誤可以得到補償所使用的現(xiàn)場儀表直接放在明亮的標本來衡量增加了相機的膠片速度指標，以減少曝光時間，曝光時間，或（如果點測光不可用）。 膠片曝光詳盡地討論在另一部分的奧林巴斯顯微鏡資源中心顯微鏡底漆 。

圖8顯示了一系列的顯微照片，示出*常見的曝光膠片的顏色透明與發(fā)生的錯誤。 試樣是一個60X的目標與校正領(lǐng)干玉米（玉米或玉米）組織拍攝的彩色薄款。 適當?shù)恼彰魉居芍醒氲膱D中的圖像（圖8（b））。 圖8（a）表示棉鈴蟲當薄膜沒有收到足夠的光線適當?shù)乇┞度橐?，和曝光不足的錯誤發(fā)生在非常暗的圖像所導致的薄膜部。 曝光不足膜會留下陰影區(qū)域太暗，缺乏細節(jié)和高光區(qū)的通常呈現(xiàn)深淺不一的黃色和灰色。 彩色透明膠片曝光誤差也不是很寬容的，只會產(chǎn)生可接受的結(jié)果，在一個半到一個正確的曝光F-停止。 通常在顯微鏡，平均標本亮度可能不會在整個視場是均勻的，并可能被包圍在明亮的背景中出現(xiàn)的細節(jié)，小暗的功能。 這帶來的問題時，使用相機的自動曝光功能，平均*過30-100％的視場面積測量曝光。 這些均可能導致曝光不足的標本有非常明亮的背景。 使用點測光（如果有的話），以緩解這一問題，或者如果電表平均視場較大部分，調(diào)整膠片速度設(shè)置，以提高曝光。 使用手動相機，增加曝光時間，或減少膠片速度調(diào)整，增加曝光。 F-STOP增量三分之一校準包圍曝光的新標本和電影，它始終是一個好主意。 中包括的中位數(shù)為每個支架的每一側(cè)上的至少兩個或三個曝光，并保持這樣的暴露試驗的準確記錄，以備將來參考。

（三）在圖8中的圖像出現(xiàn)非常薄的洗滌，由于膜的曝光過度。 過度曝光影響較輕的部分的電影，遭受顯著或圖像細節(jié)的損失總額。 發(fā)生此錯誤的原因是電影接收太多的光線，通常是由于快門速度太長或過量的光照強度。 鹵鎢燈（12伏，50 - 或100瓦），應調(diào)整到*佳顯微攝影色溫和照度之間的設(shè)置為8.5伏和9.0伏。 如果整卷被過度曝光時，故障可能是相機系統(tǒng)上的曝光設(shè)置。 觀察相機的ISO指標，看它是否符合電影的速度，并檢查，看是否正確設(shè)置快門速度。 自動攝像系統(tǒng)可以過度曝光的膜如果太長照明量的*低設(shè)置的快門速度。 中性密度濾光片，減少照明強度和執(zhí)行測試括號曝光設(shè)置撥號時使用新的標本或電影。

另一種常見的風險可能會出現(xiàn)問題自動攝影機深深的顏色時，過濾器是用來控制對比度黑白顯微攝影。 整個可見光光譜光電池或光電二極管在這樣的相機可能無法以統(tǒng)一的方式回應，并產(chǎn)生不正確的曝光計算，導致顯微照片是不是太亮或太暗。 曝光校正的過濾器，使用預定的過濾器的因素，討論了在膠片曝光部分。 始終保持正確的曝光，以確保高質(zhì)量的顯微照片的彩色濾光片的曝光信息的準確記錄。 自動相機光電二極管也可能是敏感的極化效應，偏振光顯微鏡中經(jīng)常遇到的。 使用相同的策略，并保持與彩色濾光片曝光信息的記錄。

相位差板使用偏振光或微分干涉對比，也能引起曝光不足的問題，尤其是當光電二極管的靈敏度可能不會是均勻的在整個可見光光譜或檢測器是敏感的極化效應。 在這些條件下，曝光時間的確定應通過實驗，使用括號，自動相機系統(tǒng)推薦的曝光。 用手動相機拍攝標本時，始終使用括號。

當薄膜是很暗或全黑，有一種可能性，即它沒有被暴露。 這可能是表示與電影提前機制自動相機或相機的快門系統(tǒng)故障的一個嚴重的問題。 如果整卷的未曝光，但相機似乎是正常顯微攝影過程中，檢查做出一定的攝像頭所接收光顯微鏡。 也可以通過檢查卷取軸，以確保其正常工作和電影是否正確連接。 許多自動曝光系統(tǒng)不會允許薄膜被暴露當正在接收光線不足時，但較舊的手動系統(tǒng)沒有這個安全功能。 在未曝光膠卷，只有一個或幾個幀，檢查攝像頭，以確保電影推進。