徠卡顯微鏡：激光顯微切割的原理

2020-09-04 09:28:43

組織學和生物樣本中的異質性，往往需要在分析之前，可以進行從周圍組織中的具體的單個細胞或細胞群體的隔離。激光顯微切割是一種高選擇性的樣品制備方法，DNA，RNA和蛋白質分析。它是精確的分離技術，用聚焦的激光束的樣品和組織的顯微鏡操控。

激光顯微切割的原則

要進行顯微切割，直立或倒置顯微鏡的激光被耦合到。選定的區(qū)域或什至是單個細胞，然后通過移動聚焦激光束沿其輪廓上切。此過程保證溫柔試樣的處理 - 特別是，它不傳輸任何熱的試樣 - 完全相同，并提供分析所需的材料，是。

dissectate然后輸送到收集裝置中的許多不同的方式。解剖組織，具體取決于所使用的系統(tǒng)下降到反應容器中（徠卡微LMD系統(tǒng)）在重力的作用，被彈射的反應容器（PALM系統(tǒng)中）對在重力的作用進入或間接地除去用膜覆蓋樣品（大角星和MMI系統(tǒng)）。徠卡LMD和Palm系統(tǒng)也可以用于激光顯微操作，例如通過削減在細胞分裂過程中紡錘體纖維。

激光顯微切割是一個既定的大量的應用，主要是在分子生物學，特別是核酸研究，神經科學，發(fā)育生物學，癌癥研究，取證，蛋白質組學，植物研究，切割細胞培養(yǎng)和單細胞隔離的方法。激光顯微切割甚至用于氣候研究，特別是對研究樹木的年輪。

LMD_principle

圖 1：激光顯微切割（徠卡顯微系統(tǒng)LMD系統(tǒng)）原理。第1步：定義感興趣的區(qū)域。第2步：激光束沿切割線的光學操縱。步驟3：標本采集的嚴重性。

非接觸式激光顯微切割的方法和技術

激光顯微切割提供精確和污染的解決方案，為單細胞或組織的分離和篩選。組織樣本可以被嵌入，根據常規(guī)方法制備的切片，染色。石蠟切片，冰凍切片，涂片制劑，染色體標本和細胞培養(yǎng)都適合激光顯微切割。解剖選定的區(qū)域繪制在電腦屏幕上，并用激光束從周圍組織中自動分離。熒光標記也可以使用特殊的濾光塊的激光傳輸的全方位解剖標本。該dissectate然后立即輸送到收集裝置（以不同的方式，根據該系統(tǒng)的制造商）做進一步的檢查。

有不同的激光顯微切割技術。PALM系統(tǒng)，例如，在一個固定的激光束移動的試樣。在這里，所選擇的區(qū)域被切去從周圍組織中，由一個單一的激光脈沖被激活之后，非接觸式運輸。所選擇的組織被提升從檢體滑動，彈射到一個集合中的移動設備對在重力的作用。

在重力的作用是選擇徠卡系統(tǒng)的方法。在這里，樣品被固定，并且在它被移動的激光束。這樣便于觀看的樣品，落入收集裝置和dissectate單獨受力的重心。切削過程中的精確度是光耦合到所選擇的倍率。倍率越高，自動導致更精細的步長寬度的激光束和其運動是相同的程度減少。在這種情況下，沒有其他的工作步驟是必需的。不僅是單個細胞，而且較大的區(qū)域可以通過在一個單一切除。盡管轉移dissectate收集裝置的不同的方法，但沒有接觸或污染的風險。

然而，其他一些非接觸的方法也可用于激光顯微切割（大角星，MMI）。

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