奧林巴斯顯微鏡：熒光和相襯的組合

光漂白的影響減到最小，熒光顯微鏡可以不破壞與其他技術(shù)相結(jié)合的熒光染料，如微分干涉相差（DIC），霍夫曼調(diào)制對比度（HMC），傳送暗場照明，相位相反的。

我們的想法是找到一個(gè)感興趣的具體領(lǐng)域使用非破壞性的對比度增強(qiáng)技術(shù)，然后在一個(gè)標(biāo)本，沒有搬遷的標(biāo)本，在顯微鏡切換熒光模式。這種類型的一個(gè)典型的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果示于圖1。圖1（a）示出了使用相位對比光學(xué)成像的3T3成纖維細(xì)胞的單層組織培養(yǎng)。細(xì)胞行成立由美國國立衛(wèi)生行瑞士小鼠胚胎細(xì)胞，這是高度接觸抑制和有用的研究，涉及形成肉瘤病毒和白血病病毒傳播。的顯微照片，圖1（b）中示出的相同的視場，但是這一次成像使用熒光照明（汞蒸氣燈和一個(gè)奧林巴斯吳過濾器立方體）的細(xì)胞染色的熒光染料4'，6 - 二脒基-2 - 苯基吲哚（DAPI ），具有最大發(fā)射波長在461納米，這是用來選擇性地染色細(xì)胞核和染色質(zhì)的核酸特異性染料。圖1（c）示出這兩種技術(shù)的組合使用，以產(chǎn)生熒光染3T3細(xì)胞核的成纖維細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞器內(nèi)部的相位對比度的圖像疊加在一個(gè)美麗的顯微照片。此圖片是記錄一個(gè)專門的螢石目標(biāo)相環(huán)的設(shè)計(jì)允許同時(shí)觀察熒光和相襯的目標(biāo)是一致的。

在圖2中示出在顯微鏡的配置通常利用同時(shí)圖像標(biāo)本同時(shí)使用相襯和熒光照明。相襯進(jìn)行使用透射光所提供的鎢鹵燈的位置連接到顯微鏡的基礎(chǔ)上在一個(gè)燈箱。的視場光闌的光通過被反射到臺下聚光鏡由相位環(huán)形空間，并通過適當(dāng)?shù)某叽纭?/span>

試樣衍射的光的相位板放置在物鏡后側(cè)焦點(diǎn)面上面的中間圖像平面與試樣未衍射的光通過干涉之前首先通過。同時(shí)，紫外線燈發(fā)出的由水銀燃燒器通過一個(gè)激勵器過濾器，然后由二向色鏡反射來自上述檢體上。二次發(fā)射的熒光通過附加的染色標(biāo)本的發(fā)色基團(tuán)被捕獲的物鏡和通過屏障過濾器，對準(zhǔn)目鏡和/或光電管。此配置可用于圖像標(biāo)本使用的技術(shù)（熒光，相位相反）單獨(dú)或結(jié)合使用。