熒光激發(fā)塊噪音終結(jié)者

熒光激發(fā)塊噪音終結(jié)者

由尼康一種創(chuàng)新的熒光濾波器塊設(shè)計(jì)有助于消除發(fā)生在熒光顯微鏡光學(xué)路徑，極大地提高了發(fā)射信噪比殘余雜散光的可能性。稱(chēng)為噪聲終結(jié)者，這種技術(shù)會(huì)指示偏離雜散光遠(yuǎn)離物鏡聚光的路徑，從而導(dǎo)致圖像對(duì)比度的顯著改善。這種互動(dòng)式的教程演示如何噪音終結(jié)者技術(shù)功能。

教程初始化含有激發(fā)和屏障激發(fā)塊，以及一個(gè)二色鏡，出現(xiàn)在窗口中的傳統(tǒng)的熒光濾波器光學(xué)塊（從倒置顯微鏡）。來(lái)自光源的光子（黃色球）從窗口的右手側(cè)進(jìn)入過(guò)濾塊并通過(guò)激發(fā)濾光片，它是一個(gè)帶通濾波器，允許主要510和560納米（綠色光）之間的波長(zhǎng)穿過(guò)。離開(kāi)激發(fā)濾光片（綠球）的光被偏轉(zhuǎn)在由二色鏡90度角和*多的目標(biāo)和標(biāo)本。一些短和更長(zhǎng)的波長(zhǎng)，其能夠通過(guò)激發(fā)濾光片的（在教程作為紅色和藍(lán)色球體表示）不被二色反射鏡偏轉(zhuǎn)并通過(guò)。這些光子，這是在熒光顯微鏡噪聲的主要來(lái)源的一部分，從光學(xué)塊的內(nèi)部反射，并能夠穿過(guò)屏障激發(fā)塊以?xún)A斜角度，*終到達(dá)檢測(cè)器。

為了操作教程，使用照明強(qiáng)度滑塊來(lái)調(diào)節(jié)進(jìn)入激發(fā)塊的光學(xué)模塊的光子數(shù)。該激活噪音終結(jié)者復(fù)選框（默認(rèn)禁用）可以啟用展示尼康導(dǎo)流技術(shù)，有效地捕捉光子，否則將產(chǎn)生噪音。當(dāng)噪音終結(jié)者復(fù)選框被激活，光子流經(jīng)光學(xué)塊插入終止子管的后部，并通過(guò)中性密度材料吸收，從而逸出的顯微鏡的光路。不得到由中性密度材料吸收任何的光被反射到終止子管在那里*終分散的末端。該顯微鏡配置單選按鈕，可以采用光學(xué)塊和噪聲終止子取向?yàn)橹g選擇倒立（默認(rèn)）的組織培養(yǎng)物或傳統(tǒng)直立式儀器。使用教程速度滑塊通過(guò)光學(xué)塊，以控制光子流的速率。

任何熒光顯微鏡的基本特征是提供一種機(jī)制，以選擇性地過(guò)濾照射，隨后通過(guò)使用第二濾波器，使在暗背景上具有*大靈敏度的圖像形成弱得多的熒光發(fā)射信號(hào)的隔離檢體的激勵(lì)。在生物樣本的局部探針濃度是如此之低，只有激發(fā)光的一小部分是由熒光物質(zhì)吸收了許多實(shí)驗(yàn)。那些熒光團(tuán)是能夠吸收照明的數(shù)量，這將發(fā)射次級(jí)熒光的百分比。此外，甚至更低。所得熒光發(fā)射的亮度級(jí)將介于幅度小于該照明的3至6和命令。因此，在熒光顯微鏡的根本問(wèn)題是，產(chǎn)生的樣品的高效率照明，同時(shí)捕捉微弱的熒光發(fā)射被有效地從更強(qiáng)烈的照明帶分離。這些條件是通過(guò)對(duì)激發(fā)塊坐標(biāo)基于該二色分光器的操作和性能的激發(fā)和發(fā)射要求的組合滿(mǎn)足現(xiàn)代熒光儀器。

后面的反射光熒光顯微鏡二色分光鏡（反射鏡）的功能的原則在在紅色（620至660納米）的可見(jiàn)光光譜的波長(zhǎng)的綠色區(qū)域（550納米）和熒光的教程激發(fā)光照進(jìn)行了概述。一種高強(qiáng)度光源輸出一個(gè)寬的激發(fā)波長(zhǎng)的光譜在高磁通密度（通常覆蓋大部分的紫外線(xiàn)和對(duì)整個(gè)可見(jiàn)光譜的），它穿過(guò)所述照射器和*遇到選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)帶為激發(fā)濾波器（標(biāo)有激勵(lì)在本教程激發(fā)塊）。在這種情況下，激發(fā)塊通過(guò)510和560納米之間的光的波長(zhǎng)具有高效率，但也允許其它波長(zhǎng)通過(guò)在一個(gè)較小程度。激發(fā)光下一個(gè)到達(dá)的二色反射鏡，并反射到物鏡后孔，以形成照明該沐浴試樣的錐體。該二色鏡被定位在光路成45度角，并設(shè)計(jì)成選擇性地反射490和565納米（基本上藍(lán)綠色和綠色波長(zhǎng)）之間的波長(zhǎng)，而同時(shí)發(fā)射兩個(gè)短和更長(zhǎng)的波長(zhǎng)。（奧林巴斯顯微鏡）

因?yàn)楣獾膬H一個(gè)窄的帶寬是由二色鏡反射，照射波長(zhǎng)小于490納米，并且長(zhǎng)于565納米的管理通過(guò)該激發(fā)濾光片也通過(guò)二色鏡發(fā)射。需要注意的是激發(fā)光的反射是不是100％的效率，因此，少量的綠色光通過(guò)二色鏡穿過(guò)而不被反射。此外，并非所有的光具有波長(zhǎng)高于565或低于490納米的通過(guò)反射鏡被發(fā)送。這種光的一小部分是由通過(guò)物鏡的反射鏡并到達(dá)樣品反射。通過(guò)二色鏡從激發(fā)濾光片透射光的一部分被平坦黑色涂層在激發(fā)塊塊的內(nèi)部被吸收，但一些反射從表面并穿過(guò)所述屏障激發(fā)塊以斜角，有助于熒光背景噪聲。