尼康顯微鏡激發(fā)塊HYQ套裝

尼康顯微鏡激發(fā)塊HYQ套裝

尼康HYQ熒光濾波器組合組包括四個(gè)小心平衡高性能集，所有這些并入帶通發(fā)射（阻擋）濾光片的熒光的一個(gè)有限的波長(zhǎng)范圍內(nèi)的選擇性隔離。 命名為每個(gè)HYQ濾波器集合反映了它被設(shè)計(jì)主要的熒光染料的名稱，但其各自的激發(fā)范圍內(nèi)，每一種組合可以應(yīng)用于各種適宜的熒光染料。

兩個(gè)HYQ熒光過濾器集傳輸綠激發(fā)光（TRITC HYQ和Cy3 HYQ），而一個(gè)提供黃色區(qū)域的激發(fā)（ Texas Red HYQ），一個(gè)是專為橙紅色的激發(fā)（Cy5 HYQ）。 HYQ濾光片組合的典型特征是更廣泛的帶通激發(fā)和發(fā)射濾波器，比起許多標(biāo)準(zhǔn)集，以便提供增加的能量傳輸和增強(qiáng)熒光信號(hào)電平。 作為一個(gè)群體，在HYQ過濾器組合提供的光譜范圍，包括激發(fā)波長(zhǎng)從530納米（綠色）至650納米（紅色），和排放檢測(cè)，從573納米（黃色），以738納米（紅外線）的范圍。激發(fā)濾光器的通帶是30，55，或60納米的寬度，并且被組合為60或75納米的發(fā)射濾波器的通帶。

各個(gè)HYQ過濾器集的性能可以通過檢查標(biāo)本選擇的圖像標(biāo)記與具有相匹配的通帶和切割在過濾器上的組合的波長(zhǎng)，如示于圖1中的有袋動(dòng)物（大鼠袋鼠光譜曲線的熒光團(tuán)進(jìn)行判斷; PTK2細(xì)胞系在圖1中給出）細(xì)胞角蛋白中間纖維網(wǎng)（a）的免疫熒光染色與偶聯(lián)于Cy3的抗細(xì)胞角蛋白抗體，而在圖1（b）的線粒體（印度麂皮鹿皮成纖維細(xì)胞）的標(biāo)記MitoTracker紅CMXRos。 同樣地，從肌動(dòng)蛋白絲的網(wǎng)絡(luò)（印度麂）熒光在圖1（c）示出從將Alexa Fluor 568綴合鬼筆環(huán)肽起源。 所有這些探針都在與Nikon HYQ過濾器集組合是有用的。 在深紅色熒光發(fā)光區(qū)域，將Alexa Fluor 647進(jìn)行良好（在圖1的HeLa細(xì)胞的細(xì)胞核（D））與Cy5的HYQ濾波器組合的組合。

HYQ濾波器集合的高性能設(shè)計(jì)的功能包括實(shí)現(xiàn)更寬濾波器的通帶，同時(shí)保持高信噪比，與信號(hào)頻帶之間的最小交叉（光譜bleedthrough）。 這些目標(biāo)是通過使用過濾器制造技術(shù)，包含在兩個(gè)激發(fā)和發(fā)射濾光片更大數(shù)目干涉腔，以產(chǎn)生很陡的切口上，并切斷過渡在過濾器傳輸曲線來實(shí)現(xiàn)。 反射和透射的波長(zhǎng)范圍之間的這些尖銳的邊界允許通帶附近的精確定位，以彼此從信號(hào)交叉的小的性能下降。 其結(jié)果是，以提供最高的激發(fā)效率和最大熒光檢測(cè)，同時(shí)保持信號(hào)的分離在幾個(gè)熒光團(tuán)時(shí)，他們被組合在多個(gè)標(biāo)簽的技術(shù)。

設(shè)計(jì)用于綠色波長(zhǎng)激發(fā)兩個(gè)HYQ過濾套，TRITC HYQ和Cy3的HYQ，采用相同的帶通濾波器激發(fā)（530至560納米）和二色鏡（570納米截止波長(zhǎng)）。 兩個(gè)檢測(cè)熒光的橙色?紅色光譜區(qū)域，但不同之處在于所述Cy3 HYQ發(fā)射濾波器的通帶更寬的進(jìn)一步延伸向低波長(zhǎng)的光，在黃色區(qū)域中。 在Cy3 HYQ組合的75納米發(fā)射通帶范圍從573到648納米; 在TRITC HYQ設(shè)置限制排放量，以590至650納米的更窄60納米范圍內(nèi)。

對(duì)熒光團(tuán)在較長(zhǎng)的波長(zhǎng)比由所述兩個(gè)綠色激HYQ組合提供的激發(fā)，在Texas RedHYQ濾波器集合包含一個(gè)激發(fā)濾光器帶通帶從綠色至黃色區(qū)域延伸（532至587納米）到下部橙色的波長(zhǎng)。 一個(gè)595納米的二色鏡的組合截止波長(zhǎng)和從橙色延伸到遠(yuǎn)紅（608至683納米）發(fā)射濾波器的通帶可容納一寬范圍的熒光染料的，除了Texas Red。 該過濾器的組合是相似于Y-2E / C黃色激發(fā)組，具有更廣泛的激發(fā)和發(fā)射帶通窗，允許它傳送更多的能量，并產(chǎn)生相對(duì)亮的圖像。 55的寬的傳輸通帶和75納米的激發(fā)和發(fā)射濾波器，分別與銳截止通和截止的轉(zhuǎn)換導(dǎo)致更高的性能表征濾波器集合與HYQ指定。

所述Cy5 HYQ濾波器集合是最長(zhǎng)波長(zhǎng)HYQ組合，并提供了寬60納米的激發(fā)頻帶跨越整個(gè)橙光譜區(qū)并延伸到紅色（590至650納米）。 熒光發(fā)射檢測(cè)是可能的，從深沖的波長(zhǎng)的75納米的頻帶化為無形近紅外區(qū)域內(nèi)，并且在許多應(yīng)用中需要使用CCD或其他紅外敏感檢測(cè)器，用于充分利用。 所述Cy5 HYQ寬的通帶與尖銳躍遷為激發(fā)和發(fā)射濾波器，用于信號(hào)產(chǎn)生和檢測(cè)提供增加的能量，是典型在Nikon HYQ系列濾波器組合。 所述Cy5 HYQ集的發(fā)射通帶的中心在700納米，和從663至738納米的延伸。 低（切上）的波長(zhǎng)被定位只有3納米以上660納米截止上長(zhǎng)通雙色鏡。

• TRITC HYQ -綠色波長(zhǎng)激發(fā)的過濾器組合是專為提高性能，熒光染料，如TRITC和DII。 相比典型地用于本申請(qǐng)中的一些綠色激發(fā)套，一加寬激發(fā)通帶和紅移二色鏡切口上向一個(gè)較高的信號(hào)電平，這些熒光團(tuán)，并允許DsRed的熒光蛋白變體改進(jìn)的檢測(cè)和遠(yuǎn)紅色熒光HcRed蛋白質(zhì)。

• Cy3 HYQ -綠色激發(fā)濾光片組合有類似的組件信息的G-2E / C組，盡管它產(chǎn)生通過擴(kuò)大通帶窗戶增加激發(fā)和發(fā)射能量。 此外，發(fā)射通帶延伸到較低的波長(zhǎng)（入黃），從而導(dǎo)致在那些既明亮和偏向橘黃色的色調(diào)的圖像。 這是用于檢測(cè)的花青熒光探針的Cy3，特別是在多標(biāo)記技術(shù)，其中，它減少了從熒光團(tuán)發(fā)射的遠(yuǎn)紅和近紅外干擾所建議的過濾器的組合。

• Texas Red HYQ - 濾波器組合用于與熒光探針Texas Red和CY3.5使用進(jìn)行了優(yōu)化，具有更廣泛的激發(fā)和發(fā)射通帶比同類Y 2E / C組。 因?yàn)樗玫降妮^高的信號(hào)電平，和發(fā)射通帶以波長(zhǎng)更長(zhǎng)的延伸，相對(duì)于在Y-2E / C組，該組合產(chǎn)生了在色調(diào)明亮，更偏紅的圖像。 Texas Red HYQ組合提供了用于探測(cè)發(fā)射于超出在Y-2E / C發(fā)射帶的上限波長(zhǎng)改進(jìn)的性能，同時(shí)限制從熒光團(tuán)發(fā)射的深紅色和近紅外干擾。

• Cy5 HYQ -濾波器的組合是唯一的尼康組設(shè)計(jì)用于高能量紅色波長(zhǎng)的激發(fā)，并且，雖然優(yōu)化用于與熒光Cy5標(biāo)記的使用，所述寬橙黃色到紅色激發(fā)范圍是適合于采用各種應(yīng)用熒光染料。 在遠(yuǎn)紅到近紅外波長(zhǎng)熒光產(chǎn)生，相應(yīng)于發(fā)射濾波器的通帶，在很大程度上是不可見的人的眼睛，而最有效的檢測(cè)需要使用的光電倍增管或CCD攝像機(jī)。 寬濾波器的帶通區(qū)域，結(jié)合陡峭截止點(diǎn)和截止轉(zhuǎn)換，保持最大的信號(hào)分離和信號(hào) - 噪聲比，HYQ濾波器系列的特性。（奧林巴斯顯微鏡）

四個(gè)尼康HYQ濾光片組合使用激發(fā)波長(zhǎng)為530納米（綠）至650納米（紅色）。 熒光團(tuán)的寬陣列已經(jīng)開發(fā)了使用的量，各個(gè)HYQ套被設(shè)計(jì)的綠色，黃色和紅色光譜區(qū)域內(nèi)的激發(fā)波長(zhǎng)的調(diào)查。 每個(gè)濾波器組頁(yè)面相關(guān)的激發(fā)波長(zhǎng)類（綠色激發(fā)濾光片組為TRITC HYQ和Cy3的HYQ組合，黃色的激發(fā)套為Texas Red HYQ，紅色的激發(fā)集Cy5 HYQ）包括許多編目的表常用染料和熒光探針，和過濾器的組合，使他們能夠被可視化。 局部環(huán)境顯著影響熒光團(tuán)的吸收光譜和發(fā)射光譜的最大值（峰值）波長(zhǎng)的光，并且因此，在表中給出的值可能與實(shí)驗(yàn)條件而變化。 列表僅意圖作為過濾器和熒光團(tuán)的選擇的引導(dǎo)，而不應(yīng)被認(rèn)為是詳盡的或窮盡的匯編。許多包括在表中的熒光探針是專有的，已經(jīng)開發(fā)了以最小化，同時(shí)確保了熒光染料的吸收和發(fā)射光譜，并共同熒光濾光片組合之間的最大的重疊光漂白。 注意，由于寬的吸收和發(fā)射帶，多個(gè)在各表中所列的熒光探針也適用于與其它激發(fā)波長(zhǎng)區(qū)域?yàn)V光片組合使用。