尼康顯微鏡選擇熒光蛋白的雙標(biāo)記實驗

通過熒光蛋白和其色移性遺傳變異體顯示出了廣泛的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜曲線設(shè)計使用兩個或更多的同時這些**探針的活細(xì)胞成像實驗時，往往需要專門的考慮。主要關(guān)注的是從顯著程度的排放而導(dǎo)致的譜法，熒光蛋白的組合重疊通常表現(xiàn)出潛在的出血，經(jīng)過文物。這種互動式的教程探討匹配的熒光蛋白雙標(biāo)記的調(diào)查與問候光譜帶寬和重疊，激發(fā)效率，發(fā)射窗口的尺寸，并且需要設(shè)計合理的實驗等參數(shù)。

教程初始化與從熒光蛋白（CFP蔚藍(lán)色和HcRed - 串聯(lián)）中出現(xiàn)的光譜曲線窗口重疊在汞弧光放電燈的發(fā)光光譜的一個有用的組合的吸收和熒光發(fā)射光譜圖。還包括在初始化時該窗口是適當(dāng)?shù)臒晒鈭F(tuán)的二色性反射鏡的配置文件，以及用于發(fā)射濾波器帶寬配置文件建議的出發(fā)點。鼠標(biāo)光標(biāo)可用于拖動沿著光譜曲線窗口的波長軸的灰階發(fā)射濾波器帶寬的界限來確定*佳位置。上為每個發(fā)射濾波器的控制的右手側(cè)的雙滑塊組合或箭頭按鈕可用于調(diào)整帶寬，中心波長可以用左手箭頭按鈕來改變。拖動左邊的滑塊也意味著整個圖形的帶寬配置，同時拖動右邊滑塊增加或減少的帶寬大小。虛擬發(fā)射器的電流的中心波長和帶寬的值被連續(xù)地更新，并且在紅色標(biāo)記上方的滑塊顯示。滲出到（如果有的話）的比例是不斷更新的每個信道和光譜曲線窗口的下方顯示。 

尼康顯微鏡該二色鏡滑塊控制這些元素的截止波長曲線的位置，并且可以使用相鄰滑塊的顏色編碼的單選按鈕的每個信道之間進(jìn)行切換。同樣，汞燈的光譜分布可以通過停用激勵源復(fù)選框被關(guān)閉。 （默認(rèn)：水銀弧光燈）吸收（ab）和發(fā)射器（EM）頻譜的曲線可以通過從上方的照明源頭黃色顯示窗的框去除勾選被禁用。當(dāng)激光源被從照明下拉菜單選擇，基于在激光波長處的摩爾消光系數(shù)的激勵效率百分比顯示在照明顯示窗口上方的綠色方塊。激光線，繪制顏色近似的頻譜配置文件窗口的波長，可以通過禁用激勵源復(fù)選框被停用。為了保持當(dāng)前的教程的參數(shù)（顯示的激發(fā)和發(fā)射濾波器的配置文件等），而經(jīng)由探針或照明源的列表進(jìn)行切換，在維護(hù)狀態(tài)復(fù)選框可以啟用。新的熒光蛋白類可以使用組單選按鈕的光譜曲線窗口右側(cè)選擇隨選擇的探討下拉菜單。 

在計算本教程的值所使用的吸收光譜和熒光發(fā)射光譜記錄在受控條件下進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，僅供比較和顯示的目的。在實際熒光顯微鏡調(diào)查，光譜曲線可能會因環(huán)境的影響，如pH，離子濃度，溶劑的極性，以及在局部探針濃度的波動而變化，因此，可能不同于實驗條件下實際觀察到。