奧林巴斯顯微鏡攝影黑和白平衡

 用光學顯微鏡拍攝的數(shù)字圖像的整體色彩是不僅依賴于波長的可見光透過或樣本反射的光譜，但也對照明的頻譜內容。彩色數(shù)字攝像系統(tǒng)，使用電荷耦合器件（CCD）或互補金屬氧化物半導體（CMOS圖像傳感器），白色和/或黑色平衡（基線）的調整往往是必要的以數(shù)字圖像中產生可接受的顏色質量。

與隨機選擇的樣本圖像初始化教程，在奧林巴斯顯微鏡下拍攝的，出現(xiàn)在左邊的窗口標題標本圖像。每個樣品的名稱包括在括號中，一個縮寫，指定用于獲取圖像的對比度機制。下列術語使用：（FL），熒光；（BF）明；（DF），暗視野；（PC）相差；（DIC），微分干涉對比；（HMC）霍夫曼調制對比度，和（POL）偏光。參觀者注意捕獲的標本使用各種技術在光學顯微鏡不同的表現(xiàn)，在教程中的圖像處理。

相鄰的標本圖像窗口是平衡的圖像窗口，其中顯示的圖像后，黑或白平衡校正算法已被應用到的樣本圖像。為了操作的教程，請選擇白平衡或黑色平衡從單選按鈕平衡模式在這個教程的窗口底部的清單。下一步，選擇點的選擇或矩形選擇從區(qū)域選擇方法列表如果點的選擇選擇，將鼠標指針放置在一個地區(qū)，應該出現(xiàn)的白色或黑色的圖像，點擊按鈕，應用相應的算法對樣本圖像。的平衡的圖像窗口會自動顯示處理后的圖像與白色或黑色的校正。選擇矩形選擇單選按鈕將使一個特定區(qū)域的選區(qū)在圖像的校正算法將應用。

如上所述，數(shù)字圖像的色彩平衡是由CCD或CMOS圖像傳感器采集的光譜波長的影響很大，無論傳感器被安置在一個照相機，望遠鏡，激光臺，或顯微鏡。彩色數(shù)碼相機，使用這些固態(tài)器件，一系列的平衡的調整往往是必要的為了生產出可接受的彩色圖像，符合照明光源的色溫。

人的眼睛是很容易適應不斷變化的照明條件下，為了確定一個白色物體白即使周圍的亮度和顏色的溫度波動。相反，數(shù)碼相機需要仔細推敲的紅，綠和藍（RGB）的調整，信號的振幅，以產生類似的結果。大多數(shù)數(shù)碼相機需要測量和顏色的溫度以確保白色物體的記錄為白色的調整，以保證其他顏色也接近可接受的范圍內。這個過程通常被稱為調節(jié)白平衡，是許多數(shù)碼相機的軟件和/或硬件選項。

為了舉例說明點，色溫度的一個典型的例子（或色彩平衡）在數(shù)字圖像與光學顯微鏡的錯誤，如圖1所示。一個明場圖像地龍蒺藜（共同的蚯蚓）拍攝的顯微鏡之前和之后的白平衡調節(jié)的查找表。在調整白平衡的設置（圖1（a）），圖像有一個整體的綠色鑄造，軟化染色和蘇木素染色和面具的背景顏色（它應該出現(xiàn)的白色或淺灰色）。顯微鏡的查找表的白平衡調整后，明亮的染色的顏色是沒有任何演員和揭示組織內均勻分布（圖1（b））。此外，背景已轉移到一個很輕的中性顏色，通常觀察到當成像的標本在明場照明。

標本接手區(qū)應慎重選擇白平衡測量，因為在試件文物會導致在白平衡測定誤差。在較暗或高度著色的標本，相機的黑色平衡應該設置，如果可能的話。的標本或蓋玻璃的存在或不存在的折射率的差異可能導致球面像差，從而影響白平衡測量（雖然一個最小的程度）。此外，生物染料出血也可以在安裝介質引起顏色的變化，導致在白平衡校正誤差。只要有可能，使用字幕（矩形選擇）工具選擇白平衡測定面積最大。這使軟件平均白平衡計算在一個更大的像素數(shù)會產生更多的可接受的結果。在某些情況下，尤其是當只有一個像素被選中，整體的白色或黑色的平衡測定可以被破壞，導致不適當?shù)恼{整圖像。

最好的白平衡校正往往是實現(xiàn)數(shù)碼相機時，指著相反的物體的顏色白色卡片，或試樣從顯微鏡階段完全除去，達到均勻照明的背景。一個標本的地方設置白平衡可以使圖像獲得色，這會嚴重影響圖像的對比度和偏離的對象或標本的顏色效果。此外，在偏振光圖像，微分干涉相襯，熒光，或其他的對比度增強技術可以在色彩平衡的調整更加困難。這通常發(fā)生在背景假設由于攝像機和顯微鏡的光學配置的色彩。例如，當一個一階延遲板插在偏光顯微鏡偏光器和分析器之間，整個視野呈現(xiàn)紅色，使黑或白平衡調整非常困難。在奧林巴斯生物顯微鏡微分干涉對比觀察到類似的效果。在許多情況下，黑色的平衡值是建立更容易，從而導致更清晰的圖像與黑色的背景和一個顯著的整體圖像對比度的改善。

現(xiàn)代消費和科學CCD數(shù)字相機系統(tǒng)通常包括參考電路，包含一個數(shù)字信號處理器（DSP）設計的電子調節(jié)的傳感器記錄圖像的顏色平衡電路。處理電路提供了一系列的查找表，這是用軟件來調整紅，綠，藍，為信號到達正確的色彩平衡，為一個特定的光照強度和色溫。通常，查找表將包含有關鹵鎢燈信息（在各種顏色的溫度），汞和氙弧放電燃燒器，閃光燈管，發(fā)光二極管，其他普通照明源之間。的RGB系統(tǒng)是一種主要的顏色模型用于指定和控制相機和軟件代表顏色。白色是結合三種顏色（紅，綠等零部件生產，和藍色）在百分之100的水平。色溫度的調整，可以很容易地通過調整一個或多個這些原色的強度水平。

除了相機系統(tǒng)，電腦或視頻監(jiān)視器用來查看圖像往往需要一種色溫為匹配的數(shù)字攝像頭采集的顏色信息，相應的調整。許多計算機軟件包中包含一個白色的點算法，使軟件相匹配的色溫調整，但硬件必須經常調整好。計算機顯示器通常有外部的調整，允許用戶對色溫的幾種選擇之間切換，范圍從9000 K到5000 K，這些設置可以更改以匹配標準的觀看條件，以確保在屏幕上看到的圖像是真正代表一個由攝像機捕獲的。