奧林巴斯顯微鏡光染色與DIC顯微鏡

2020-09-03 14:41:14

 通過引入雙折射補(bǔ)償板成一個(gè)微分干涉對(duì)比DIC)的顯微鏡的光路,被*過的灰度值的一個(gè)有限的范圍內(nèi)以其他方式呈現(xiàn)透明的標(biāo)本可以轉(zhuǎn)化通過稱為光學(xué)染色的技術(shù)中,以顯示多種顏色的。 這種互動(dòng)式教學(xué)探討如何改變偏見遲緩的量會(huì)影響染色的標(biāo)本圖像實(shí)現(xiàn)的外觀和水平。

教程初始化與隨機(jī)選擇的DIC圖像中出現(xiàn)的具有施加到光學(xué)系統(tǒng)中的小偏差的延遲值(1-第二十一個(gè)波長)的標(biāo)本圖像窗口。 要操作教程,為了在試樣圖像產(chǎn)生高階干涉色翻譯偏置遲緩滑塊移動(dòng)到較高的值(在右邊)。 該滑塊有1/20和遲緩的全波長之間的工作范圍。 新的標(biāo)本可以通過選擇在選擇樣本下拉菜單中選擇相應(yīng)選項(xiàng)進(jìn)行檢查。

在微分干涉對(duì)比正常和非常波陣面之間的偏置相位差可以通過使用補(bǔ)償器的*初目標(biāo)是定量的相位差測(cè)量裝置和對(duì)比度增強(qiáng)元件為偏振光顯微鏡來操縱。 補(bǔ)償板賦予更大的控制,用于調(diào)整試樣的細(xì)節(jié)的對(duì)比度相對(duì)于背景亮度和顏色值,并且還使波陣面之間的偏差值的更精確的調(diào)整。 這些雙折射元件也經(jīng)常用于透明的標(biāo)本,其通常呈現(xiàn)在灰度值的有限范圍內(nèi)的光的染色。

當(dāng)一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的客觀諾馬斯基棱鏡沿著*越四分之一波長,這兩種試樣的特征和背景的路徑差的顯微鏡光軸翻譯獲得的牛頓干涉色類似于那些在偏振光顯微鏡觀察到的光譜。 樣品和背景成為光學(xué)上的彩色顏色的該遷移通過一系列的灰度值,通過白色,黃色,紅色,藍(lán)色和更高階的過渡。 光染色產(chǎn)生的戲劇性和精美的彩色圖像,但僅限用于科學(xué)應(yīng)用。 通常,*佳的標(biāo)本對(duì)比度僅限于二十分之一到的相位差的四分之一波長的范圍內(nèi)。

補(bǔ)償器可插入任一目標(biāo)棱鏡和分析儀或偏振器和冷凝器的棱鏡之間的DIC顯微鏡的光學(xué)路徑。 許多顯微鏡有位于中間管或臺(tái)下聚光住房為此而設(shè)計(jì)的一個(gè)插槽。 另外的一階補(bǔ)償器(通常稱為全波一階紅色板)具有相位差值等于全波長在可見光(約550納米)的綠色區(qū)域,引入的干擾色的光譜,以樣品和背景。 用在這里的補(bǔ)償器,綠色光不能穿過分析儀,因?yàn)樗霈F(xiàn)從相位差板的線偏振光與電場矢量具有相同方向的偏振器。然而,在紅色和藍(lán)色光譜區(qū)域的波陣面會(huì)遇到比波長小于相位差,成為橢圓偏振光,使他們能夠通過分析器傳遞組件。 其結(jié)果是,這些顏色成為混合以形成品紅色背景中的視場。

奧林巴斯顯微鏡

因此,當(dāng)試樣中的白色光用微分干涉對(duì)比光學(xué)和一階補(bǔ)償器觀察到的,而圖像的對(duì)比度被顯示在的二階藍(lán)色和一階黃色的顏色(取決于方向)的背景顯示品紅色牛頓干涉色光譜。 有了補(bǔ)償,偏置遲緩小的變化由諾馬斯基棱鏡(或旋轉(zhuǎn)偏振鏡以脫Sénarmont補(bǔ)償器)產(chǎn)生的具有大的路徑長度梯度結(jié)構(gòu)觀察快速變化的干擾色的翻譯得到的。 這種技術(shù)是用于將彩色(光染色),以具有高折射率的邊界,如細(xì)胞膜,細(xì)胞內(nèi)的大顆粒,纖毛和細(xì)胞核的區(qū)域是有用的。 由試樣的特性所顯示的干涉色可被比作一個(gè)米歇爾 - 列維顏色圖表上的值,以獲得的光程差的估計(jì)值。

如圖1所示,是已被光學(xué)地染色,并通過DIC光學(xué)技術(shù)呈現(xiàn)在偽三維浮雕幾個(gè)透明標(biāo)本。 圖1(a)給出了預(yù)測(cè)在櫛鱗魚鱗的邊緣,而犬鉤蟲( 鉤蟲 )的嘴的特點(diǎn)是在圖1(b)所示。 大豹蛾(Ecpantheria scribonia)五顏六色的翅膀上的鱗片列于圖1(c)。 在所有情況下,利用Nomarski棱鏡被穿過顯微鏡光軸轉(zhuǎn)換為偏置相位差值*過一個(gè)完整波長。 雖然這些圖片沒有透露有關(guān)該標(biāo)本隱藏的科學(xué)信息,他們確實(shí)有提前DIC的光學(xué)顯微鏡的技術(shù),因?yàn)榭茖W(xué)和藝術(shù)之間的橋梁合法的潛力。

上裝有一個(gè)去Sénarmont補(bǔ)償器用于引入偏置到一個(gè)微分干涉對(duì)比光學(xué)系統(tǒng)的顯微鏡,一個(gè)全波相位差板可以被添加到光學(xué)染色用牛頓干涉色的樣品,并提供有關(guān)路徑的差異更加定量的信息。 去Sénarmont補(bǔ)償器經(jīng)常采用在DIC顯微鏡取得偏置相位差的精確測(cè)量的水平,但該設(shè)備也有用以監(jiān)測(cè)光學(xué)部件的對(duì)準(zhǔn)。 在視頻增強(qiáng)DIC(VE-DIC)的顯微鏡,德Sénarmont補(bǔ)償器通常用于優(yōu)化在標(biāo)本細(xì)節(jié)對(duì)比度在于下面的顯微鏡的分辨率極限。