顯微鏡暗視場觀察法

暗視場觀察法，可以觀看通常的動植物組織切片、血液圖片、硅藻片。在觀察透明的活體標本方面，如含有細菌的液體更顯出其**性。值得指出的是，它還能觀察到小于物鏡分辨率的微粒。這些
微粒在黑暗的背景中以亮點形式出現，使觀察者能觀察到它們的存在和移動，有人稱此為*顯微術。

要實現暗場效應,*簡單的方法是在普通的阿貝聚光鏡下方插入一塊環(huán)形光闌，使照明的*小孔徑角大于物鏡數值孔徑即可。

左圖為暗場觀察法的光學原理圖。
圖中：
1． 環(huán)形光闌
2． 阿貝聚光鏡
3． 物鏡
集光鏡射出的光束，經暗場環(huán)形光闌后以環(huán)狀光束射向阿貝聚光鏡。然后以環(huán)狀的光錐照明標本，光錐*小角度即照明孔徑角，它必須大于物鏡的數值孔徑。

如果標本片內無任何東西，那么照明光線不可能進入物鏡,視場內漆黑一片。反之，標本片內存在某些東西如細菌等微粒，那么由于光的衍射與散射作用，這些光線就進入物鏡并成象，視場內將看到漆黑的背景中存在許多明亮的標本象。用插片方式實現簡易暗場，價格低廉，但只能與放大率≤40x 的物鏡配合使用。由于阿貝聚光鏡內的雜散光及色差等因素視場背景難達到完全漆黑的程度。

要達到理想的暗場效果，*好采用專用的暗場聚光鏡。這種聚光鏡有干燥型、浸液型之分。
干燥型暗場聚光鏡有幾種形式，它們的共同點是在一個透鏡上有多個球面。其中兩個是反射面，其余面是折射面。光束經過它們后，*小照明孔徑約在0.75～0.78 之間。因此，與倍率≤40 倍物鏡匹配可以獲得很好的效果。左中圖為二種干燥型暗場聚光鏡：

浸液型暗場聚光鏡由兩個相同材料的透鏡膠合而成。加上浸油后，*小照明孔徑約1.22，適合與100 倍油浸物鏡配合使用。注意，物鏡中必須帶有可變孔徑光闌，能減少物鏡的數值孔徑。否則，部分照明光束將直接進入物鏡而破壞暗場效果。其光學原理如左下圖。

注意:
－ 浸液型暗場聚光鏡使用時必須在載玻片與聚光鏡間滴上浸油。
－ 這種聚光鏡還能與干燥型物鏡配合使用。特別是高倍率的干燥型物鏡，能取得很好的效率。其缺點是，照明范圍較小。因此與低倍率物鏡，特別是4 倍物鏡，只能在視場中心部分可以進行暗場觀察，而四周無光線照明，呈現一片黑暗。

暗場效果的好壞與使用時聚光鏡的調節(jié)有很大關系。舉簡單暗場調節(jié)實例：
－ 標本上放置一半透明紙。
－ 打開可變孔徑光闌，升降帶有暗場插片的聚光鏡，使半透明的紙上呈現明亮圓形的光斑。
－ 調整聚光鏡對中螺釘，使照明光軸與物鏡光軸重合，此時視場背景應均勻黑暗。