尼康顯微鏡綠色激發(fā)塊Cy3 HYQ（帶通）
尼康顯微鏡綠色激發(fā)塊Cy3 HYQ（帶通）
都為尼康Cy3的紫外線(xiàn)，可見(jiàn)光和近紅外透射光譜曲線(xiàn)（高性能設(shè)置與尼康HYQ指定）濾波器組合下面示于圖1.該濾波器組是兩個(gè)在Nikon綠色激發(fā)系列1那采用的帶通發(fā)射（阻擋）濾波器而不是一個(gè)長(zhǎng)通型，并且按照設(shè)計(jì)，有效地限制了從熒光團(tuán)發(fā)射外目標(biāo)的光譜的波長(zhǎng)范圍的干擾。 如同在HYQ系列的其它的過(guò)濾器，切割上和截止轉(zhuǎn)換在Cy3 HYQ濾波器的斜率很陡（只有幾個(gè)大小納米），以幫助減少排放交叉，并通過(guò)頻帶為擴(kuò)大收集更多的信號(hào)。
綠色激發(fā)濾波器模塊的Cy3（HYQ）規(guī)格：
激發(fā)波長(zhǎng)篩選：530-560納米（帶通，545 CWL）
雙色鏡截止波長(zhǎng)：570納米（長(zhǎng)通，LP）
屏障過(guò)濾波長(zhǎng)：573-648納米（帶通，610 CWL）
所述的Cy3熒光濾波器組合（如以上所討論，尼康HYQ高性能干涉濾光器系列中的一員）是在結(jié)構(gòu)上的標(biāo)準(zhǔn)的帶通發(fā)射綠色激發(fā)組（G-2E / C）的相似，但具有更寬的帶通的窗口的激發(fā)和發(fā)射（屏障）的過(guò)濾器。 這些高性能的過(guò)濾器被制造具有更大數(shù)目同時(shí)在激發(fā)和發(fā)射濾光片干涉腔，允許頻譜輪廓之間的更接近而不遭受過(guò)度的串音。 該二色鏡截止波長(zhǎng)是570納米，并且是結(jié)合了介質(zhì)30納米激發(fā)通帶（530-560納米）連同一個(gè)非常廣泛的75納米的發(fā)射通帶（573-648納米）。 該組能夠有選擇性的激勵(lì)和檢測(cè)在多個(gè)標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中使用的具體流行熒光團(tuán)，并且通常適用于廣泛范圍的由綠色的波長(zhǎng)激發(fā)探針。
所述的Cy3 HYQ濾波器組合，推薦用于與花青熒光探針的Cy3使用，并且被設(shè)計(jì)成減少或消除從熒光團(tuán)發(fā)射的紅光和近紅外干擾時(shí)的探針，如四甲異硫氰酸酯（TRITC）和DII中的多個(gè)標(biāo)記中使用技術(shù)。 所述的Cy3 HYQ濾波器集合可以用基本相同的熒光染料為G-2E / C組合被利用，并產(chǎn)生，相比之下，由于增加的激發(fā)和發(fā)射能量稍微明亮的圖像所允許的更寬的帶通的窗口。 此外，發(fā)射帶通到較低的波長(zhǎng)的延伸，相對(duì)于G-2E / C組，產(chǎn)生具有色調(diào)圖像移向橙色和黃色。 Cy3的，Cy3.1.8，吖啶紅，將Alexa Fluor 546，的Alexa Fluor 555，茜素紅，BODIPY探頭，鈣橙，DiI標(biāo)記，DiIC16，DiIC18，溴化乙錠，NeuroTrace 530 /：學(xué)習(xí)以下的熒光基團(tuán)，當(dāng)Cy3的HYQ集推薦615，碘化丙啶，派洛寧B，RedoxSensor紅CC-1，羅丹明衍生物，塞夫龍河艷紅和TRITC。 在圖2中呈現(xiàn)的圖像表明具有多種針對(duì)不同細(xì)胞內(nèi)位置吸收綠光的熒光探針的這種過(guò)濾器組合的性能。
如圖2（a）是沾上MitoTracker紅CMXRos，它的目標(biāo)細(xì)胞內(nèi)的線(xiàn)粒體的網(wǎng)絡(luò)牛肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)的熒光發(fā)射強(qiáng)度。 *大吸收MitoTracker紅CMXRos的是579納米，并且*大發(fā)射發(fā)生在599納米。 另外，將試樣同時(shí)用DAPI染色（在細(xì)胞核靶向DNA;藍(lán)色發(fā)光）和BODIPY FL-phallacidin（靶向肌動(dòng)蛋白;綠色發(fā)光）。 注意沒(méi)有信號(hào)從藍(lán)色（DAPI）和綠（BODIPY）熒光團(tuán)，但明亮的橙黃色熒光由管狀線(xiàn)粒體發(fā)揮。
印度麂的鹿皮沾上的Alexa Fluor 568綴合鬼筆環(huán)肽，其結(jié)合到細(xì)胞內(nèi)絲狀肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)的成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)，是在圖2（b）中。 *大吸收的Alexa Fluor 568的是578納米，并且*大發(fā)射發(fā)生在603納米光譜的橙色區(qū)域。 另外，將試樣同時(shí)用DAPI染色（在細(xì)胞核靶向DNA;藍(lán)色發(fā)光）和MitoTracker綠FM（靶向線(xiàn)粒體;綠色發(fā)光）。 注意沒(méi)有信號(hào)從綠色（MitoTracker）和藍(lán)色（DAPI）的熒光團(tuán)，它們是不能有效地激發(fā)在綠色波長(zhǎng)，但明亮的橙紅色熒光的肌動(dòng)蛋白絲發(fā)揮。(奧林巴斯顯微鏡)
由薄小鼠腸的部分沾上的Alexa Fluor 350麥胚凝集素，藍(lán)色熒光的凝集素特定于杯狀細(xì)胞的粘液中演示了圖2的（c）的熒光發(fā)射強(qiáng)度。 另外，將試樣同時(shí)沾上的Alexa Fluor 568鬼筆環(huán)肽（絲狀肌動(dòng)蛋白; 600納米發(fā)射）和SYTOX綠（核; 504納米激發(fā)和523納米發(fā)射）。 注意背景噪聲相比于其他尼康長(zhǎng)通濾波器的組合（G-2A和G-2B），并在顯著量的Alexa Fluor 568顯示的圖像中所產(chǎn)生的黃-紅信號(hào)的低電平。
示于圖2（d）是HeLa細(xì)胞免疫熒光標(biāo)記的同隨后綴合的Alexa Fluor 546的吸收*大值的Alexa Fluor 546山羊抗-小鼠Fab片段初級(jí)抗組蛋白（鍋）鼠單克隆抗體的556納米，并且發(fā)射*大值出現(xiàn)在573毫微米（在可見(jiàn)光光譜的黃色區(qū)域）。 *抗體，從HeLa細(xì)胞的純化核級(jí)分生產(chǎn)，特異性結(jié)合的抗原決定簇，其存在于所有五個(gè)組蛋白（H1，H2A，H2B，H3和H4）。 請(qǐng)注意，從發(fā)生有絲分裂的細(xì)胞中強(qiáng)橙黃色熒光強(qiáng)度，但間期核的降低排放強(qiáng)度。
在圖2（e）在對(duì)女兒鼠袋鼠（PTK2）上皮細(xì)胞，示出，分別是那些在被免疫熒光標(biāo)記的同隨后綴合的山羊抗小鼠Fab片段初級(jí)抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體的培養(yǎng)到的Alexa Fluor 546的吸收*大值的Alexa Fluor 546的是556納米，并且*大發(fā)射發(fā)生在573納米（在可見(jiàn)光光譜的黃色區(qū)域）。 需要注意的是在整個(gè)細(xì)胞質(zhì)中延伸的細(xì)胞內(nèi)微管網(wǎng)絡(luò)的突出黃橙色染色。
自體熒光發(fā)射強(qiáng)度從松（ 火炬松 ）花粉粒是表現(xiàn)在圖2（F）。 在植物組織中的內(nèi)源性的自發(fā)熒光產(chǎn)生于各種生物分子，包括葉綠素，β-胡蘿卜素，葉黃素和。 在藍(lán)紫色區(qū)域中，葉綠素具有吸收帶，具有高消光系數(shù)，并產(chǎn)生一個(gè)顯著量熒光在與400和440納米之間的波長(zhǎng)激發(fā)。注意自發(fā)熒光發(fā)射強(qiáng)度中的橙色和紅色光譜區(qū)域的存在，這是強(qiáng)烈讓人想起暗視場(chǎng)圖像的。