奧林巴斯顯微鏡,熒光和生物發(fā)光蛋白

2020-09-04 09:51:40

 生物體的廣譜能夠通過生化機制,包括螢火蟲,水母和某些細菌發(fā)光的。 一些這些生物體的發(fā)射光通過吸收特定波長的光,而其他通過消耗身體內儲存的能量發(fā)射光。

熒光蛋白通過吸收和重新發(fā)射的光的能量發(fā)出熒光 水母,珊瑚,??湍承┘毦凶约旱纳眢w內這種蛋白質。 另一方面,生物發(fā)光來源于體內的化學反應;實例包括夜光屬的螢火蟲和物種。 發(fā)光物質要么是位于細胞(螢火蟲和夜光 )內或分泌到外部(Cypridinacea)。 雖然蛋白質參與這些化學反應,該蛋白本身并不直接發(fā)光。

奧林巴斯顯微鏡

兩個熒光蛋白和生物發(fā)光被廣泛應用于醫(yī)學和生物學研究中的應用。 成千上萬的材料已經(jīng)收集到的領域。 雖然只有少量的蛋白質,已被提取這樣的研究,蛋白質已可通過化學合成或基因工程。 是綠色熒光蛋白(GFP)及其變體的基因的市售的和被施加在細胞生物學和分子生物學領域。

熒光蛋白

  • 綠色熒光蛋白和變體 :BFP,CFP,GFP,YFP和DsRedFP

  • 藻膽蛋白 :B-藻紅蛋白(B-PE),R-藻紅蛋白(R-PE),和別藻藍蛋白(APC)

天然存在于水母的綠色熒光蛋白,在第65個至第67個位置的氨基酸已發(fā)現(xiàn)通過紫外線或藍色光激發(fā)以發(fā)射熒光(DsRed的是在??业剑?。 GFP基因用于研究在細胞水平上通過其在細胞中的表達,以可視化或追蹤活動。

藻膽蛋白是從細菌和藻類獲得的。 這些蛋白質含有共價連接熒光團。 樣品標記有藻膽蛋白,主要用于流式細胞儀,也可以在顯微鏡下觀察。

激發(fā)和發(fā)射特性 
熒光蛋白的
熒光蛋白 
波長(nm)
發(fā)射 
波長(nm)
GFPwt(Wild Type395/475510
ECFP433475
EGFP488507
EYFP513527
DsRed558583
B-PE545/565575
R-PE410/545/565578
APC650660
表1

生物發(fā)光蛋白

  • 水母

  • 熒光素-熒光素酶

間的生物發(fā)光蛋白,水母發(fā)光蛋白和熒光素是兩種*常用的生物學研究。 水母發(fā)光蛋白是一種生物發(fā)光蛋白復合物分離自水母和鈣離子濃度的測定中使用。 它包括蛋白質apoaequorin和潛伏發(fā)光分子。 當鈣離子結合的水母發(fā)光蛋白,復分解成apoaequorin和發(fā)光分子,其發(fā)出藍色光(約466納米)。 與使用熒光染料的探針的測量,使用水母發(fā)光蛋白的鈣離子濃度的測量不需要激勵和不受自體熒光。 合成apoaequorin是目前可從幾個來源。 該apoaequorin基因也可以通過其在線粒體中表達所用的鈣離子濃度的測量。

熒光素是從螢火蟲獲得的生物發(fā)光分子,它發(fā)出的光的發(fā)光時,它是由一種酶(蛋白質)命名的熒光素酶(波長長達560納米)的氧化。 因為ATP是不可或缺的螢火蟲的螢光素 - 熒光素酶反應,該反應被用于一個ATP檢測試劑盒,具有非常高的靈敏度。 這樣的ATP檢測試劑盒都可以買到。 熒光素酶基因也被分離,并且可以在細胞內被表達。