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徠卡顯微鏡 - 熒光壽命成像之FLIM-FRET應(yīng)用淺析
FRET 技術(shù)（Fluorescence Resonance Energy Transfer）能夠在突破傳統(tǒng)光學(xué)分辨率極限的條件下研究蛋白互作、構(gòu)象變化（<10 nm），或者通過構(gòu)建 FRET 探針監(jiān)測(cè)分子變化，因而在諸多研究領(lǐng)域得到了“科研大拿”們的青睞
2020-09-04 admin
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尼康顯微鏡，熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）顯微鏡與熒光蛋白的基本原理
在活細(xì)胞中，動(dòng)態(tài)的蛋白質(zhì)之間的相互作用被認(rèn)為是發(fā)揮了關(guān)鍵作用，調(diào)節(jié)許多信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，以及廣泛的其他關(guān)鍵流程。 在過去，經(jīng)典的生物化學(xué)方法，闡明了這種相互作用的機(jī)制是司空見慣，但是弱的或短暫的相互作用，可能會(huì)發(fā)生細(xì)胞內(nèi)的天然環(huán)境是這些技術(shù)通常是透明的。 例如，合作一直懷疑蛋白本地化合作伙伴使用固定細(xì)胞免疫熒光顯微鏡檢查相互作用在原地 ，并已提交了大量的文獻(xiàn)報(bào)道基于這種技術(shù)的常用方法。 然而，由于在
2020-09-04
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徠卡顯微鏡- 熒光成像新維度——超快速熒光壽命成像
熒光壽命是熒光基團(tuán)在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時(shí)間的量度。不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時(shí)間不同，大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時(shí)間在 0.2 - 20 ns。
2020-09-04 admin
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徠卡顯微鏡FRET與FLIM定量在體內(nèi)生物化學(xué)
熒光壽命是多久熒光團(tuán)保留在平均在激發(fā)態(tài)通過發(fā)射熒光光子返回到基態(tài)之前的量度。它依賴于熒光團(tuán)的分子的組合物和納米環(huán)境。FLIM結(jié)合壽命測(cè)量與成像：為每個(gè)圖像像素獲得的壽命是顏色編碼，以產(chǎn)生更多的圖像對(duì)比度。因此，F(xiàn)LIM有關(guān)其生化狀態(tài)或納米環(huán)境的信息提供關(guān)于熒光分子的空間分布的信息一起。FLIM的一個(gè)典型應(yīng)用是FLIM-FRET。FRET是一個(gè)行之有效的方法來研究分子間的相互作用。它審視蛋白結(jié)合，并
2020-09-04
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![徠卡顯微鏡：選擇你的激發(fā)波長]()
徠卡顯微鏡：選擇你的激發(fā)波長
熒光壽命成像顯微術(shù)（FLIM）被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)相互作用量化測(cè)量FRET（福斯特共振能量轉(zhuǎn)移）發(fā)生的兩個(gè)熒光基團(tuán)之間的間隔由幾納米。FLIM也被用來在大陣列的應(yīng)用范圍從組織成像熒光探測(cè)環(huán)境。雖然時(shí)間相關(guān)的單光子計(jì)數(shù)（TCSPC）熒光壽命定量方法的選擇，它要求包括：i）一個(gè)脈沖激光源，2）光子計(jì)數(shù)卡，及iii）一個(gè)快速檢測(cè)的專用儀器。這種技術(shù)要求呈現(xiàn)TCSPC收購很難執(zhí)行和/或縮小選擇可用熒光。徠卡
2020-09-03
